PEG化对二聚β肽抗肿瘤转移生物活性影响.pdfVIP

饰后主要影响了肿瘤细胞与FN的粘附。 生物学研究结果证实了：p3肽经PEG修饰后，仍具有明显的抗粘附和抗迁移、侵袭能力，与未 修饰多肽相比，作用增强或基本相似，说明PEG修饰p3肽可能为肿瘤转移的预防性治疗提供新的手 段。PEG化的最大优点是能使多肽体内的半衰期延长，冈此对于其整体实验和药代动力学参数，还 将进一步深入研究。 PEG化对二聚13肽抗肿瘤转移生物活性影响 朱瑙“4‘王松梅2沈炜明3刘银坤4 (1上海交通大学附属胸科医院药剂科上海2000302复旦大学上海医学院分子生物实验室上海 200032；3上海交通大学附属第六人民医院药剂科上海200233；4复旦大学附属中山医院肝癌研 究所上海200032) 粘附。但仍存在不足，主要是水中的溶解度相当低，而且体内的半衰期短，因而不宜作为早期肝癌 术后的预防用约。聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)修饰多肽能改善理化性质，已有很多报道。 养板作为细胞外基质成分(extracellular matrix，ECM)，观察二聚p肽和PEG修饰物对人肝癌细胞 聚D肽抗肿瘤转移活性的影响。 1材料和方法 1．1材料 癌研究所白行设计，上海生工生物工程公司合成：GRGDS(甘．精．甘．天冬．丝)、无关肽 (MKGGDLYYLMDLS)由上海生工生物工程公司合成；132-PEG由本实验室自行制备。 1．2方法 1．2．1 B2肽和p2-PEG对肝癌细胞株与FN粘附能力影响的剂量关系 将l×105／ml的10％BCS--RPMI umol／L，40lamoi／L，100u 阴性对照，将4种肽稀释成20 mol／L和200“mol／L，每孔加入100“l， 1．t la la la tl 终浓度为10mol／L，20mol／L，50mol／L和100mol／L，同时设空白组(200l细胞培养液) 及对照组(加入100lal细胞及100u l培养液)，每组设5复孔。37℃，5％C02共培养3小时后洗去 未粘附细胞，MTT法检洲96孔板上细胞浓度，观察剂量关系，同时比较PEG修饰的影响。 细胞粘附抑制率=(对照组OD平均值一处理组OD平均值)／(对照组OD平均值一空白组OD 平均值)X100％ 1．2．2 D2肽和[32-PEG对肝癌细胞株与FN粘附能力影响的时间关系 la 100la mol／L，以每孑L l加入到FN包被的96孔 将B2、132．PEG、GRGDS和无关肽分别稀释成200 板中，加入100u 培养O．5、l、1．5、2、3小时，洗去朱粘附细胞，MTT法检测96孔板上细胞OD值，观察时间关系， 同时比较PEG修饰的影响。细胞粘附抑制率计算同上。 1．2．3 B2肽和182-PEG对肝癌细胞株迁移能力的影响 在10％FCS--DMEM培养液中培养的肿瘤细胞铺满培养瓶底后，收集细胞培养上清液，加入FN 至终浓度为5lag／ml，作为条件培养基。将肿瘤细胞消化后用无血清DMEM稀释成2×106／ml细胞 la mol／L的B2 悬液，在Transwell上室中加入lOOpl细胞悬液，分别加入用无血清DMEM稀释成200 ul，对照组加入无血清DMEM 肽和132-PEG以及GRGDS各100 100Irtl。下室加入600肛1条件培养基， ．71． 倍显微镜下计数上下左右中5个不同视野的迁移细胞数，取平均值，计算迁移抑制率。 迁移抑制率=【1．(处理组迁移细胞数／对照组迁移细胞数)】×100％。 1．2．4 132肽和132-PEG对j升=癌细胞株侵袋能力的影响 左右中5个不同视野的侵袋细胞数，取平均值