黑素细胞体外培养技术的研究进展.pdfVIP

中华医学会医学美学与美容学分会20周年暨学术交流会论文汇编 受黑素细胞存在与否的影响，还与临近角质形成细胞ET．1分泌功能异常有关。马慧军等1使用体外实验发 现，ET．1可促进毛囊外毛根鞘无色素黑素细胞(AMMC)在毛囊外毛根鞘与毛囊结缔组织鞘之间的移动，并 且有利于已经移行于表皮的AMMC黏附并定植于基膜及其周围的纤维结缔组织。推测出ET-l在白癜风的 毛囊复色中发挥了重要作用。 2 内皮素·1的影响因素 在黑素细胞培养中【6]，较低的ET．1具有很好的促黑细胞增殖作用。ET-l能够刺激黑素细胞的增殖和 活性和增强酪氨酸酶的活性。体外角质形成细胞可以合成和分泌ET一1，角质形成细胞与黑素细胞混合培养 可以明显促进黑素细胞的生长。由此可见，ET—l在皮肤色素代谢方面起了一定的作用。但促使稳定期白癜 风患者血浆ET一1升高有哪些方面的原因，是否是人体的一种反馈机制所致的结果，以及患者正常皮肤角质 细胞或正常人角质细胞分泌ET．1与白癜风患者角质细胞分泌的ET—l是否存在差异性?国外有研究1发 的。皮肖冰喁1等采用放射免疫方法测定27例白癜风患者NB—UVB治疗前后的白斑部位和非白斑部位的皮 泌ET—l。中药对内皮素-1也具有一定的影响，王琪一。等研究发现，加味桃红四物汤对正常人KC具有刺激 表皮细胞分泌ET-l作用，而中药姜黄片亦能明显提高患者血浆内皮素一l的水平¨o|。 3展望 白癜风皮损色素恢复时毛囊外毛根鞘黑素细胞储库中黑素细胞活化，增值并迁移到皮损处，如何将ET— l应用于黑素细胞培养，让其成为安全有效的黑素细胞分裂剂?能否在白癜风患者进展期白斑区直接导入 一定浓度的ET-17或采用刺激ET-l的分泌，以得到黑素细胞增殖，白斑区复色?均有待进一步研究。 黑素细胞体外培养技术研究进展 唐显华综述刘志军审校 (南华大学附属第一医院皮肤科，湖南衡阳421001) [摘要]含有丰富色素颗粒，高酪氨酸酶活性的黑素细胞对色素性疾病如白癜风的病因，病理生理 研究及临床治疗的应用非常重要。本文就细胞的来源，分离，体外培养，纯化，鉴定等简要作一综述。 [关键词】黑素细胞；体外培养；分离；纯化 l 黑素细胞的生物学特征 黑素细胞起源于神经嵴，主要见于表皮基底层，外毛根鞘及毛球，具有合成酪氨酸酶的活性。酪氨酸酶 进入黑素小体后即可启动黑素的合成和贮存过程。黑素细胞浆内含有较多线粒体，内质网，高尔基体。其中 还可见特化的细胞器——黑素小体。每个黑素细胞和其周围的36个角质形成细胞构成表皮黑素单位。黑 素细胞的主要功能是合成黑素，通过树突将黑素颗粒输送给其相联系的角质形成细胞，使皮肤维持正常肤 色，免受紫外线及光致癌因子的损害．黑素细胞几乎遍布所有的组织，最常见于表皮、真皮、眼、血管周围等。 面部、生殖器部位的黑素细胞分布密度较高心”。 ·8l· 中华医学会医学美学与美容学分会20周年暨学术交流会论文汇编 2组织来源 培养用黑素细胞主要来源于人和小鼠的皮肤。人的皮肤多取自外科手术如包皮环切术的包皮一J，整形 美容术的面部皮肤Hj，小鼠来源的黑素细胞一般取新生小鼠的全层背部皮肤】。 3标本的处理 取下的标本可以用中性蛋白酶，胰蛋白酶，EDTA等进行消化，这些物质可以单独使用，也可以分批使 用，目前以分批使用居多。第一天：取下的皮肤组织用75％乙醇浸泡10min，用PBS清洗3次，去除皮下组织 和血块，将组织分切成5mmx5 h。第二天：将中性蛋白酶消化过皮片取出后分离真皮和表皮，用胰蛋白酶一EDTA消化分离表皮层37℃5 millx2 rain，用眼科剪将皮片剪成更小的皮片(2 ram)，加入含10％血清的DMEM培养液中止消化，200 g离 心5min，弃上清液细胞团加入黑素细胞培养液，反复吹打获得单细胞悬液，以5×105／mL的密度接种于培 J．纠 养皿中，置于95％的湿度、5％C02的37℃培养箱中培养。【3 4培养液 E