肠出血性大肠杆菌O157%3aH7+ler%2fstx基因缺失弱毒菌株的构建和免疫.pdfVIP

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 ler／stx基因缺失 肠出血性大肠杆菌0157：H7 弱毒菌株的构建与免疫 刘 军，孙洋，冯书章’，郭学军，齐种，祝令伟，尹铁勇 (军事医学科学院军事兽医研究所，长春130062) 董要0157：H7感染是重要的新发食物螈性传染病，主要致病特征之一是能引起人肠上皮细胞特征性 的／rE损伤。A／E损伤主要是由LEE致病岛所编码的毒力园子所引起，／er是LEE致病岛毒力基因群的中心调 节基因，对LEE致病岛所编码的毒力因子有正调控作用。0157：H7另一十毒力固子是由整合到染色体上的厚 57：H7 噬茵体编码的Stx毒素。本研究以0186—24为始发菌株，利用自杀性质粒pCVD442和同源重组的原理 构建了Ol57：H7的let基因缺失突变菌株，井利用噬菌体消除技术筛选到消除了编码Stx的原噬菌体DNA的 57：H7 菌株．构建出了01 leHstx基因缺失突变弱毒菌株，井对该菌株的Vero细胞毒性、小鼠模型的安空性 leHstx基因缺失突变菌株丧失了对Vero细 以及乳鼠的被动免疫保护作用进行了研究。结果表明，0157：H7 胞的毒性作用，并丧失了对实验小鼠的致病性，具有良好的安全性。乳鼠被葫免疫保护性实验表明，用该菌 57：H7leHstx 株免疫母鼠后。乳鼠通过吸吮母乳可以获得良好的被动免疫保护作用。因此本研究所构建的Ol 01 基因缺失突变弱毒菌株可作为预防EHEC57：H7感染的疫苗候选株，为最终研究制出0157的基因工程菌苗 奠定基础。 关键词0157：H7，基因缺失突变，免疫接种，疫苗 肠出血性大肠杆菌(Enterohemollhagic 是一个世界性的公共卫生问题。0157：H7感染主要引起婴幼儿腹泻、出血性结肠炎(HC)和溶血性尿 9000余人受到感染，近lO个府县都有发病。我国自1986年徐州首次报道以来，福建、甘肃、浙江、 0157：H7感染性腹泻暴发流行，患者超过2万例，死亡177例，由此可见，我国也受到此病的威胁。 of EHEC locus 0157：H7的主要毒力因子包括两部分，一部分是染色体上的肠细胞脱落位点(The and 与脱落(attachingeffacing，A／E)损伤所必需的。b(LEE—encoded 岛内…，其编码产物Ler是LEE致病岛的转录活化因子，可以激活LEE致病岛毒力因子的表达”J。通 过对肠致病性大肠杆菌的研究表明，如r基因的缺失可导致细菌毒力大大降低”1。0157：I-17另一个主要 的毒力因子是志贺毒素(Shiga ”I。本研究以野生型0157：H786-24为始发菌株。利用自杀性质粒和同源重组的原理，敲除LEE致病 菌株作为疫苗的可能性，为最终研究制出EHEC0157的基因工程菌苗奠定基础。 1材料和方法 1．1材料 本研究所使用的寡核苷酸引物、质粒和菌株分别见表1和表2所示。本研究所用小鼠均为昆明鼠， 基金项目：国家自然科学基金资助(No 作者简介：刘军(1977年一)，男，四川盐亭县人，博士研究生，助理研究员，主要从事分子细菌学研究。 }通讯作者：E-mail：shuzhangf@yahoo．COIn 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集445 购自卫生部长春生物制品研究所。 表1本研究所