化学发光免疫研析法检测肿瘤标志物.pdfVIP

化学发光免疫分析法检测肿瘤标志物 韩金利综述康熙雄审校 首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心 100050 【摘要】肿瘤标志物作为诊断肿瘤的一项重要指标，其检测对于肿瘤的普查、辅助诊断、疗效观 察和预后判断具有重要的意义。化学发光免疫分析法是一种灵敏度非常高的分析方法，现已广泛应用 于肿瘤标志物的检测研究中。随着发光试剂与检测仪器的不断进步，化学发光免疫分析法的研究也在 不断深入发展，作为检测肿瘤标志物的一种重要方法，将在肿瘤的早期诊断以及预后的监测中发挥愈 加重要的作用。本文从化学发光体系、检测仪器以及高新技术在该领域的应用及产生的影响三个角度， 综述了化学发光免疫分析法用于肿瘤标志物检测的研究进展，对该领域未来的发展进行了展望。 【关键词】化学发光 免疫分析 肿瘤标志物 肿瘤是一类严重威胁人类生命和健康的恶性疾病，2002年世界卫生组织(WHO)公布全世界每年新 增1000万癌症病例，目前世界上死亡人数中有12％死于癌症。肿瘤标志物Tumormarker，TM)作为一 项重要指标，在肿瘤的早期诊断中发挥着越来越重要的作用。肿瘤标志物是指在肿瘤发生和增殖过程 中，由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。这类物质可反映细 胞恶变各阶段表型及基因特征性。与正常组织相比，标志物明显增高，并存在于血液、细胞、组织或 体液中”1。大多数情况下体内肿瘤标志物的含量都非常低，一般的检测方法很难对其进行精确的定量。 过去对肿瘤标志物的检测主要用放射免疫分析法，但是存在敏感性不高、操作复杂、测定结果不稳定、 试剂保存时间短、放射性污染、仪器昂贵等缺点。因此，迫切需要发展一种新的检测方法对血液中TM 进行精确的定量分析。化学发光免疫分析法检测正好适应了这种需要。本文从化学发光体系、检测仪 器以及高新技术在该领域的应用及产生的影响三个角度，对化学发光免疫分析法用于肿瘤标志物检测 的研究进展，及对该领域未来的发展趋势进行综述。 1．不同化学发光体系在肿瘤标志物检测中的应用 化学发光免疫分析包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。根据其标记物的不同可 分为三大类型，即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。 1．1化学发光免疫分析 化学发光免疫分析(Chemiluminescence 原的一类免疫测定方法。用于标记的化学发光试剂应符合以下几个条件：(1)偶联后能保持发光试剂高 的量子效应和反应动力；(2)与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物；(3)对被标记物的理化特性， 尤其是免疫活性影响很小。鲁米诺类和吖啶酯类化学发光试剂是最常用的标记发光试剂。庄惠生等旺1 采用自己设计的一种新的合成吖啶酯的方法，并利用自制的双吖啶发光标识物13110，10I_二甲基一3，3f_ 一412— 1．2化学发光酶免疫分析 化学发光酶免疫分析(ChemiluminescenceEnzyme 行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，根据测定的发光信号进行定量分析。目前， 常用的酶标记物有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)，它们有各自的发光底物。HRP常用的 发光底物是鲁米诺及其衍生物，使用HRP标记抗体，进行免疫反应后，利用鲁米诺作为发光底物，在 过氧化物酶和起动发光试齐II(NaOH和H：0：)作用下，鲁米诺发光，发光强度依赖于酶免疫反应物中酶 的浓度。AP和1，2一二氧环乙烷构成的发光体系是目前重要、灵敏的一类化学发光体系。这类体系 APS一5为代表。APS一5作为发光底物具有以下优点1． 类化合物91，以美国Lumingen公司的Lumingen 极高的灵敏度，能够检测到少于10—9摩尔的AP分子；2．在极短时间内发光强度即达到峰值并长时间 保持稳定，因而在何时测量都能得到重复性很高的测定结果。3．宽大的线性范围，在测定高浓度样品 时无需稀释。4．在22—25。(2范围内，发光反应对温度不敏感，因而无需温度控制。 催化H：O：氧化曙红的反应和HRP催化H：0：与发光剂鲁米诺的化学发光反应相耦合，测定血液中AFP的 行了检测。 1．3电化学发光 电化学发光(electmchemiluminescence 程。在电极上施加一定的电压或电流时，电极上发生电化学反应，在电极