SD大鼠自体免疫性前列腺炎模型的建立和其生物学特性研究.pdfVIP

SD大鼠自体免疫性前列腺炎模型的建立及其生物学特性研究 李冬梅，胡文娟，孙祖越· 上海市计划生育科学研究所药理毒理学研究室，中国生育调节药物毒理检测中心， 上海200032 ·通讯作者：sunzy64@163．coin 【摘要】目的建立sD大鼠自体免疫性前列腺炎的模型，并研究其生物学特性。方法将32只SD 大鼠随机分为四组，其中一组为对照组，其它三组为试验组，在第0和第7天，进行皮内多点注射， 百白破疫苗。在第21天，腹腔注射大鼠前列腺蛋白提纯液。在第35天，处死所有大鼠，对大鼠前 列腺解剖学、显微镜下的病理学、血液自细胞数、血清钙离子、IgG、睾酮(T)和双氢睾酮(DHT) 等指标进行测定和研究。结果和阴性对照组相比，高剂量造模组前列腺表现出明显的慢性前列腺 炎的病理变化，其他两组不如高剂量组明显。高剂量模型组的钙离子浓度明显降低。结论多点多 次皮内注射80me,／mt的大鼠前列腺蛋白提纯液与FCA的混悬液，腹腔注射百白破疫苗可成功地建 立自体免疫性前列腺炎SD大鼠模型，并显示明显的生物学特性。 关键词：自体免疫g前列腺炎；大鼠模型；生物学特性 前列腺炎是男性的常见病，国内外研究表明：其发生率为4-11％，且有逐年增加的趋势，近半 数的男性在其一生中的某个时候会受到前列腺炎的影响。其中慢性非细菌性前列腺炎占临床发病率 的90％以上，其发病机制至今未明。目前，学术界认为慢性非细菌性前列腺炎与自体免疫有判11， 我们将在本研究中，建立自体免疫性前列腺炎SD大鼠模型，并研究其生物学特性。 1材料与方法 1．1实验动物、试剂和仪器 1．1．1实验动物 清洁级SD大鼠雄性250-300克，由上海西普尔．必凯实验动物有限公司提供，在上海市计划生 自由饮水、摄食。 1．1．2主要仪器 CoBAS 瑞士生产的T℃妇}|E MIRA全自动生化分析仪；法国生产的ABVETASC(169)血 球计数仪；德国TECO有限公司生产的COATRONM4凝血仪：MAGIMNZYMEⅡI磁酶免定量测 Zenith 定仪：Anthm 200st酶标仪；莱卡(Leica)RM2126切片机；BECKMANJ2-21高速冷冻离心机。 1．1．3主要试捐 深圳市新产业生物医学工程有限公司：双氢 完全弗氏佐剂(FCA)：Sigma公司；睾酮(T)： 睾酮(DHT)： Laboratories，百白破疫苗：武汉生物制品研究所。 AdlitteramDiagnostic 1．2实验方法 1．2．1大鼠前列腺蛋白提纯渡的制作 超净室和超净台紫外光消毒1小时并通风，把消毒好的物品器械放在超净台上，把5只300克 左右的SD大鼠脱颈椎处死，消毒后放在超净台上，用剪刀剪开大鼠腹部皮肤和肌肉，提起膀胱， 清楚地暴露前列腺，剪下整个前列腺(连膀胱)放入冰生理盐水中，修掉脂肪、膀胱，并清洗3．5 遍，剪碎前列腺组织，放在玻璃匀浆器中匀浆，匀浆器置与放了冰块的烧杯中，保持低温，把匀浆 充分的前列腺组织用吸管吸入离心管中，高速离心机15000转，分，4℃，配平后离心30分钟，用 吸管吸去上层脂肪组织，再吸取上清液共3ml，放入冷冻管保存备用(-20C)。取余下的上清液0．2 ml，等比稀释后依次放入96孔板，在酶标仪上读取OD值，并按照拟合的标准曲线读取上清液的 浓度。从标准曲线上查出OD值对应的浓度，把蛋白提纯液稀释成20、40和80mg／ml的浓度。 1．2．2动物分组及造模 32只SD大鼠适应性饲养一周后，按体重随机分为4组，阴性对照组、低、中和高剂量模型组， 每组8只，除阴性对照组外，其他各组分别于第0、7天，在大鼠2只脚掌、腹股沟和颈部4处皮 内注入大鼠前列腺蛋白提纯液与FCA(等比混匀)混悬液lⅢI，剂量为：脚掌O．1mix2只，腹股 沟0．4ml，颈部O．4ml，腹腔注射百白破疫苗0．5IIll，第2l天腹腔注射大鼠前列腺蛋白提纯液0．5 ml。其中，低、中和高剂量模型组注射的大鼠前列腺蛋白提纯液浓度分别为20、40和80mg／rlll。 阴性对照组在相同的时问和部位注射相同体积的生理盐水。在第35天时，处死所有大鼠。 1．2．3实验取材 1．