谷氨酰胺与甘氨酸激活雷帕霉素靶蛋白信号通路减轻烧伤大鼠心肌损害的实验研究.pdfVIP

会议报告论文J139 谷氨酰胺和甘氨酸激活雷帕霉素靶蛋白信号 通路减轻烧伤大鼠心肌损害的实验研究 吕尚军；张勇；孙勇；吴炜；王林；王臻；彭曦幸 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所，创伤．烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆，400038 烧伤早期即可出现心肌缺血缺氧损害，是较为严重的并发症之一，也是加重烧伤后休克、导致 多器官功能损害的重要原因之一，为此有学者提出了“休克心”概念o．21。因此在烧伤早期实施有效的 心肌保护措施对于有效纠正休克，防止组织器官缺血缺氧损害，延缓脏器的进一步损害具有重要意 义。甘氨酸(glycine，Gly)延缓烧伤所致大鼠心肌损害作用的研究已有报道【3，4】，并应用于临床心 Gin对心肌损害有很好的保护作用p，6J，但是Gin溶解度低，不能做为常规静脉制剂，使其难以作为 急救药物应用于烧伤早期心肌损害的防治，谷氨酰胺二肽的出现很好的解决了Gin溶解度过低这个 问题。但目前用于临床的谷氨酰胺二肽为丙氨酰一谷氨酰胺二肽，其主要的副作用为，在补充G1ll 的同时，供给了大量的生糖氨基酸(丙氨酸)，不利于烧伤患者血糖的控制。将Gin和Gly合成为 甘氨酰谷氨酰胺二肽(glycyl．glutamine 低又能避免供给过多的生糖氨基酸。目前GlyGIn已开始应用于临床，主要应用于肠道疾病的治疗， 如肠瘘、短肠综合征等i但尚未见GlyGIn对于烧伤后心肌损害保护的报道。甘氨酸和谷氨酰胺具有 信号调控作用，但对烧伤后心肌细胞信号调控作用的研究未见报道。为此，本实验研究了甘谷二肽 对严重烧伤所致大鼠心肌功能损害的疗效并初步探讨其信号机制，以期为烧伤病人的治疗提供理论 依据。 材料与方法 公司。 实验前动物禁食12h，对照组不予烧伤，其它组采用1％戊巴比妥钠(40mg／kg)腹腔麻醉，背部电 推剃毛，称重后置剃毛区涂抹固体汽油燃烧18s，造成30％体表面积IIIo烧伤(病理切片证实)。伤 后按50 (1．59／kg．d)。为使各组大鼠摄入为等氮等热卡，更具可比性，采用灌胃补充酪氨酸的方法将各组总 相8只大鼠)，各组于伤后单笼饲养，自由进食进水。 3．细胞模型：心肌细胞分离采用胰酶组织消化法，细胞随机分为对照组(C)、烧伤组(B)和给药 1402009全国肠外肠内营养学术会议 组(Gin和Gly组)。对照组采用普通培养基培养不予任何处理。烧伤组和给药组均给予10％烧伤血清 损伤30min后，提取细胞总蛋白。 4．动物指标与操作方法：烧伤后12、24、48、72h观察下述各项指标：(1)心肌力学参数测定： 大鼠麻醉按5mL／kg剂量腹腔内注射20％乌拉坦，麻醉后仰卧固定于鼠台，剪开颈部正中皮肤，分离 出左颈总动脉，远端结扎，从近心端将自制充满100u／ml肝素生理盐水的聚乙烯导管插入至左心室， 导管远心端与三通管、压力换能器、载波放大器串接八导生理记录仪(RM--86型，日本光电公司生 织GSH的测定：力学参数检测完毕后断颈处死大鼠，立即剖胸取出心脏，剪切左心室部位(心尖区)， GSH分 定管OD值一测定空白管OD值)／(标准管OD值一空白管OD值)×标准管浓度(0．5mmoL／L)x 子量÷组织蛋白含量(g／L)。组织中蛋白含量测定采用BCA蛋白测定法测定。(3)心肌组织AMP、 ADP、ATP和EC的测定：取心脏左心室立即用在液氮中预冷的金属夹板将心肌组织夹成冰冻薄片， 后用超声波细胞粉碎器将线粒体膜打碎，使能量物质全部释放于溶液中(以上操作过程均在冰水中进 ATP。 胁郫吨e=瑞罴群‰ J。 温下振摇lh，化学发光。操作步骤按常规操作p 10．0统计软件包，各组间比较采用单因素 6．统计学处理：实验数据以x+SD表示，采用spss 方差分析，部分数据采用相关分析，以p0．05表示相差显著，pO．Ol表示相差非常显著。 结 果 1．烧伤后大鼠心肌组织GSH含量的变化：烧伤后各组心肌组织中的