鲍鱼菇菌种SCAR标记鉴别技术研究.pdfVIP

中国菌物学第四届会员代表大会箜全国第七屑菌物学学术讨论会 鲍鱼菇菌种的SCAR标记鉴别技术研究 熊芳刘新锐谢宝贵+ (福建农林大学菌物研究中心福州350002) 克隆及测序，设计特异性扩增引物，转化成SCAR标记。本研究用4个SCAR标记建立了鲍鱼菇菌种鉴别技术。 SCAR标记；SCAR引物 关键词：鲍鱼菇；SRAP；RAPD 鲍鱼菇(Pleurotusabalonus)属于担子菌弧门、侧耳属、层菌纲、伞菌目、侧耳科、侧耳 属，原分布于我国台湾、福建等省。又名台湾平菇、黑鲍耳，是一种中高温型珍惜食用菌。据报 道，由于鲍鱼姑淀粉含鼍非常低，故极适用于糖尿病人食用，对肥胖症、脚气病、坏血病及贫血 患者，也是一种食、药兼用的理想食品，具有较高的食用价值和商业价值(启泉2007)。现今我国 台湾和大陆部分地区已开始人面积生产。 由于鲍鱼菇和侧耳属其他菇的形态和生物学特性相近，再加上各栽培区菌种相互串引，栽培 出菇后冠以新名又使得鲍鱼菇同种异名或异种同名的现象异常严重。此外，部分生产者在市场上 将其他菇也命名为鲍鱼菇，造成鲍鱼菇市场菌种名称异常混乱。不但给科学研究和学术交流带来 障碍，而且对规范生产和产品质量标准的制定带来很大困难。 本研究运用ISSR、RAPD、SRAP三种分子标记综合分析16个鲍鱼菇的亲缘关系，并在此 基础上成功构建4对特异性引物应用于鲍鱼菇菌种的鉴别，并结合真菌基因组核糖体 DNA(rDNA)的基因间隔区ITS序列，以期达剑区分“同种异名、同名异种”现象，明确鲍鱼菇 各栽培种的亲缘关系和分类地位的目的。获得足够多的特异性片段，进行SCAR标记转化，从 DNA水平上评价鲍鱼菇菌种资源的多样性，并区分同种异名、同名异种现象，为鲍鱼菇核心种 质的构建和资源的利用提供依据。 1．材料与方法 1．1供试菌株 16株鲍鱼菇菌株均为福建省食用菌种质资源库(福建农林大学菌物研究中心)保藏菌种。 试验编号、资源库保藏号、菌种来源列于表1。 1．2试剂 使用UNIQ．10柱式同收试剂盒回收特异条带，购自上海SangonlpMDl8-T载体、Taq酶、 coli．DH5 a；其它试剂均 dNTPs等均购自TaKaRa公司(大连)：用于制备感受态的菌株Escherichia 为进口或国产分析纯试剂。 ．3目的片段的回收(参考试剂盒说明) 1．4感受态细胞的制备(参考分子克隆实验指南)用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌。 1．5与蓑体的连接 18-TVector上。 接到载体pMD 1 8-T pMDveclor(50ng) l}ll 回收DNA片段溶液或PCR产物 却l SolutionI 501 16C连接5—8h后自接用于转化。 ．6转化 min，轻轻摇动EP (1)将上述连接产物溶液101al加到1001al制备的感受态菌液中，冰浴30 ‘通讯作者：xbg@pub2．fz．fj．ca 中国菌物学第四届会员代表大会墼全国第七届菌物学学术讨论会 管2—3次，以充分混匀。 min。 (2)冰浴后将EP管转入42℃水浴中热激90s，然后立即冰浴3—5 50 rain。 LB培养基，在37℃振荡(1rpm)培养60 (3)；01入890pl (4)分别取0．1ml涂布于含有5 Oilg／ml氨卞青霉素(Amp)的LB平板培养基上。 (5)37℃培养过夜，观察转化后菌的生长状况。 1．7阳性克隆的检测一菌落P僳 崩灭菌的牙签从平板培养基上挑取白色菌落，蘸剑10u1灭菌的ddH20中，混匀后取其中的