多重PCR技术同时检测副溶血弧菌和溶藻弧菌方法的建立初步应用.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会论文集 多重PCR技术同时检测副溶血弧茵和 溶藻弧菌方法的建立与初步应用 立1 刘 阳1，一，孔繁德P，徐淑菲1，吴德峰2，林 (1．厦门出入境检验检疫局，福建厦．f-j361026；2．福建农林大学动物科学学院，福建福纠’I350002) 摘 要：为建立多重PCR方法用于同时快速检测海产品中的副溶血弧茵和溶藻弧茵，本研究根据副溶血孤 Premier 6．0设计了针对这2种细菌的2对特异性引物， 菌(va)和溶藻弧菌(vA)的toxR基因序列应用Primer 建立了能快速同时检测这两种细菌的多重PCR方法，并对该反应体系的特异性和灵敏度进行分析。结果显示纯 2．32×103 2．56×103 培养细菌的检测灵敏度分别为VP cfu／mL和VA cfu／mL，临床病料检测灵敏度分别可达VP 2cfu／mL和vA3cfu／mL；与枸橼酸杆菌、沙门氏茵、美人鱼弧茵、霍乱孤茵、麦氏弧茵没有交叉反应。研究表明 本实验方法操作简便快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好，并且经济实惠每个PCR反应成本不到1元，值得 推广应用。 关键词：副溶血孤茵；溶藻孤茵；多重PCR 应用【6】。本研究旨在利用多重PCR技术，参照Gen． 副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus，简称 VP)和溶藻弧菌(Vibnoal西n01)幢cus，简称VA)均属 弧菌科弧菌属，是通过食物、水传播的病原菌。VP PrimerPremier6．0设计2对针对VP和VA的特异性 和VA具有相似的生物学特性和同样的致病性，是 引物，建立同时检测这2中细菌的PCR方法，以期 引起腹泻和食物中毒的重要病原菌。 待达到快速同时检测这两种细菌的目的。改善这两 据报道VP的危害仅次于沙门氏菌、大肠杆菌、 种细菌原有检测方法的弊端，将这两种细菌的检测 葡萄球菌和肉毒梭菌。我国沿海地区每年都有因 方法进一步完善。现将结果报告如下。 VP引起食物中毒的报道【心】。VA是海产品中的优势 菌种，近年来国内外报道VA引起急性腹泻和食物 1材料和方法 中毒病例日益增多。VA广泛分布于自然界，是海 洋生物弧菌病中危害最大的病原菌之一，对水产养 1．1 殖业造成了巨大的经济损失。世界上各个国家食品 卫生法规中均把该菌列入法定检测项目，一经发现 禁止进El和出口㈣。为有效控制这2种病原的发生 扩散，准确即时的检测手段正是预防控制、传播的 用菌株除VP为购买外，其余均由厦门出入境检验 检疫局检验检疫技术中心动检实验室分离鉴定和保 关键所在。而多重PCR技术克服了单一PCR技术 不能同时检测多个细菌的弊端，因此目前多重PCR 存。 技术越来越受到微生物工作者的青睐，得到广泛的 基金项且，：国家质量监督检验检疫总局科技计划项目(2010IK016) 作者简介：刘1；日(1985．)，女，山东青岛人，硕士研究生，主要从事动物疫病快速检测方法的研究 ·通信作者：孔繁德(1967．)，研究员，博士，E-mail：kfd67@sina．corn 一273— 中国畜牧兽医学会奋牧髀医生物技术学分会暨中到免疫学会博医免疰分会第凡次学术研讨会论文集 Code Code：DVgl0A)和PCR反戊试制盒(TaKaRa利用所选挥的最佧条件分别进行多莆PCR扩增．以 DNA DROOlA)蚂自人连宜生物I．氍柯限公。