分子生物学技术在病理诊断及研究中应用.pdfVIP

2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 CCCAAAGGGC CTCCTGCTTC TGTCC——3’ 1)5’一GACAG AGCTTCCATAACACCTGTCTGGTGA——3’ 2)5’一TCAGC CATTCCTTCA GGCCAGAAGC CGGCC一3’ 3)5’一TCATG 从理论上讲，多相探钊‘是越多越好。根据实验经验， 一般三相探针的敏感性就足以达到cDNA探针的 水平。 寡核苷酸探钏‘是三相探针，且应用3’一尾段标记法，从而大大提高了原他杂交的敏感性。此外，采 用敏感性加强窄原位杂交检测法，由于有多级信号放大，使敏感性明显高于只有一步的酶标地高辛抗体 ISBDetection 检测法。我们采用MGMT Kit对96例胃癌及胃溃疡病变进行检测，结果表明多聚寡核 苷酸探针技术标记敏感性高，背景清晰，定位明确，重复效果稳定。 原位杂交操作过程长，每个步骤稍有彳i慎，都会导致失败。我们的体会是：组织及时用4％多聚甲醛 除与组织细胞非特异性结合，以增强信号，减少背景染色。但小能时间太长，以免降低敏感性。必要时 通过预实验来确定杂交后的洗涤时间和次数。 综上所述，MGMT寡核苷酸探钏‘地高辛标记，由于采用多相寡核苷酸探针和高效敏感标记必威体育精装版技术， 并配合敏感加强型的原位杂交方法。因此，获得了敏感性高、特异性强、背景清晰、稳定性好、操作简 便、准确可靠的结果，具有重要的临床和科研价值。 分子生物学技术在病理诊断及研究中的应用 00853) 王琼吕亚莉钟梅(中国人民解放军总医院病理科1 目Ij{『，分子生物学技术广泛应用于医学各学科。应用到以病变组织或细胞的形态学观察为主的传 统的病理学后，使得的病理学研究和诊断深入到基因水平，从遗传学的角度揭开疾病的本质，为科研 和临床辅助诊断做出了巨大的贡献。本文将介绍几种分-了生物技术在病理中的应用情况。 insitu 一、荧光原位杂交(fluorescence hybridization，FISH)在病理中的应用 荧光原位杂交是应用荧光素等标记的探引‘与组织细胞中待测核酸反应形成杂交体，用荧光显微镜或 激光共聚焦显微镜观察信号表达．主要用于分裂中期或分裂间期细胞核的染色体分析。FISH技术灵敏性 高，克服了免疫组化中假阳性高的问题。 与原能杂交技术相比，FISH更加安全、快速、特异性好、定位准确。Jin等发现11号染色体 的目的基冈，提示该基冈可能在食管癌变中起着关键作用。此外，FISH的优点在于其敏感性接近放 射性标记探针，在同一切片或涂片上利用／卜同颜色的荧光标记探针可同时检测2个以上的靶核酸序列。 大于2．2判断HER一2基冈扩增，其中HER．2基冈扩增156例(44．6％)，均为浸润性导管癌。 chainreaction，PCR)在病理中的应用 二、聚合酶链式反应(polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应，可在在体外迅速扩增DNA模板数百力．倍 PCR(Polymerase 2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 的操作技术。 situ l、问接原位PCR(indirectin PCR) 问接原化PCR即先在组织切片或涂片上对靶核酸进行PCR反应，DNA扩增后应用地高辛标记的寡 核苷酸探针进行原化杂交及显色反应。熊旱．琦等以RH株弓形虫速殖了感染小鼠后第2、4、6d处死， 取肝脏制备石蜡标本及冰冻切片标本，以问接法原化PCR扩增在18例标奉均检测到弓形虫DNA的阳性 8)。 信u．，病原体检出率为100％