特殊染色技术在终丝病理中应用.pdfVIP

2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 123．特殊染色技术在终丝病理中的应用 党秋红郝志伟张欢欢杜艳敏曾宪旭王玉平 郑州大学第三附属医院病理科 现代病理学中免疫组织化学技术、电子显微镜技术以及其它细胞及分子生物学技术应用 日益广泛，但由于这些技术要求一定的实验条件以及所需的试剂价格较为昂贵，对于一部 分病人以及某一些医院是比较难以接受的。而组织化学技术则具有无需复杂的实验条件以及 较为昂贵的实际操作又比较简单的优势在临床病理里诊断中具有重要的应用价值。比如当细 胞中出现色素，是黑色素还是含铁血黄素以及当组织中出现均一化学物质是否为淀粉类物质 等，用组织化学技术区别起来很简单，所以组织化学技术，虽然已有几十年到几百年的历史， 仍是一个很有实用价值的技术。 组织化学染色的方法很多，这里仅介绍几种常用的组织化学染色在终丝病理中的应用。 1．Van Gieson苦味酸酸性复红法(VG法) 用途：VG法用于区分胶原纤维和肌纤维。该法证实了终丝内的胶原纤维成分，排除了 肌纤维的干扰。 原理：酸性复红和苦味酸对这两种纤维都具有较强的亲合力，结果胶原纤维被酸性复红染成 红色，肌肉被苦味酸染成黄色。此方法是一种优良的传统方法。 固定：10％福尔马林 切片：4．6微米 试剂： Weigert铁苏木精液： rnl。一般配制后需要数周或数月自然氧化，成熟后使用。 A液：苏木精lg，无水酒精100 IIll。 B液：29％三氯化铁水溶液4ml，蒸馏水95IIll，盐酸l 两液分别配制，临用时A、B液等量混合，过滤后使用。24h后失去染色能力。 Van Gieson液： l％酸性复红水溶液 10Inl 苦味酸饱和水溶液 90IIll 临用时l：9混合过虑后使用。 2．VanGieson苦味酸酸性复红法(VG法)步骤： 1．石蜡切片脱蜡至水。 min。 2．Weigert苏木精液5．10 3．充分水洗。 min。 4．VanGieson液1．5 5．95％酒精迅速分化数秒。 6．无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。 结果：胶原纤维呈红色、肌肉、神经胶质、胞浆、红血球呈黄色、细胞核呈黑色或棕蓝色。 3．Schmorl染色法 该法证实了终丝内胶原纤维间还有弹力纤维的存在。 石炭酸．品红液：碱性品红29，无水酒精50ml，熔化石炭酸25ml，在3712温箱过夜，冷后 过滤。 201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 在锥形烧瓶内煮沸，加29％三氯化铁水溶液12．5ml搅拌并继续煮沸2-5mine。冷后过滤，烘 干滤纸及沉淀，放入烧瓶并加95％酒精100ml在水浴加温至染料全溶解，待冷却后过滤， 并补足因加热蒸发的酒精至100ml。最后加浓盐酸2ml摇匀备用。 弹力纤维Sehmorl染色法步骤 1．石蜡切片脱蜡至水。 2．石炭酸．品红液37℃染lh，或室温24h。 3．70％酒精漂洗。 4．Weigert间苯二酚．品红液染色20．30min。 5．无水酒精分色约1／2h，如染色过度也可改用0．5％盐酸的95％酒精分色。 6．流水冲洗后换蒸馏水漂洗。 7．常规苏木精染核5．10rain。 8．水洗。 9．VanGieson液复染3-5min。 lO．蒸馏水洗。 11．酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：弹力纤维蓝黑色，胶原纤维红色，肌纤维黄色，细胞核蓝色 4．网状纤维染色法 用途：除了用于区别肿瘤的性质和来源外，还可以证实终丝内也有网状纤维。 原理：氨银液被组织吸咐与组织中的蛋白结合，经甲醛还原成黑色的金属银沉积于组织内及 表面。用氯化金调色后，再用硫代硫酸钠液洗去未还原的银盐，从而将组织内的网状 纤维清晰地显示出来。 固定：10％福尔马林 切片：4．6微米 用品：经酸清洁过的玻璃器皿。要求用高纯度试剂，溶液要纯净。配制好的氨银液可以短期 内4C保存，一般能保存lW。超过时间会失去染色作用。 5．改良Glees和Marsland染色法 试剂： 1．20％硝酸银水溶液： 2．Glees溶液：20％