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植物活性多糖的提取方法.doc
植物活性多糖的提取方法有多种,在水提醇沉的基础上,常采用酶解、微波、超声波,膜处理和CO2超临界萃取等方法进行辅助提取或精制.最常用的还是水提醇沉法.
举例: 蒽酮比色法，具体步骤
一、仪器、试剂和材料
1.仪器：电子天平，超声波清洗器，电热恒温水浴锅，抽滤设备，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等
2.试剂：
(1)葡萄糖标准液：l00 μg/mL
(2)浓硫酸
(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 mL浓 H2SO4中。当日配制使用。
3.材料：甜高粱，甘草
二.操作步骤
1.葡萄糖标准曲线的制作
取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：
管号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖标准液（mL）
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.6
0.8
蒸馏水（mL）
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.4
0.2
葡萄糖含量（μg）
0
10
20
30
40
60
80
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴沸腾起计时，准确煮沸l0 min，取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（μg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品粉碎，105 oC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。
3.稀释：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀。
4.测定：吸取1 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水替代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。
三、结果处理：
C × V总 × D
样品含糖量（%）= ————————————— × 100%
W × V测 × 106
其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（μg），
V总——提取液总体积（mL），
V测——测定时取用体积（mL），
D——稀释倍数，
W——样品重量（g），
106——样品重量单位由g换算成μg的倍数
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