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维普资讯 菌物研究2005，3(1)：58—62 JournalofFungalResearchVo1．3，No．1，2005 ISSN 1672—3538 几种主要分子生物学技术在真菌生态学研究中的应用 李 娟 ” 1．中国科学院沈阳应用生态研究所 ，辽宁 沈阳 110016 2．中国科学院研究生院，北京 110039 摘 要：真菌在 自然界的物质循环与降解等生态过程中发挥着重要的作用，是生态系统的重要组成部分。然 而约9o％的真菌种类仍然未知，且大部分难于分离和培养。因此核酸杂交；核酸序列分析；DNA指纹分析等 分子生物学技术被用于真菌分类、鉴定、种群结构、群落多样性研究。本文综述 了这几种主要分子生物学技术 的基本原理及其在真菌生态学研究中的应用现状。 关键词：真菌生态；分子生物学技术；DNA指纹分析；应用 中图分类号：Q78；Q948．122．3 文献标识码 ：A 文章编号：1672．3538(2005)01．0058．05 据估计[1-3J自然界中约有 150万种真菌，但至 象多态性 (SSCP)技术等等为真菌多样性和群落结 今被正式描述的种类只 占5％～10％。真菌是非 构研究提供 了新的方法。本文介绍 了这几种主要 常重要的分解者，它们在生态系统的物质和能量 分子生物学方法的原理和应用 。 循环以及维持生态系统平衡 中发挥着重要作用。 1 几种主要分子生物学技术原理及应用 真菌多样性和群落结构是真菌生态学研究的重要 内容。然而群落中真菌的种类，数量和种群量大 1．1 核酸杂交技术 小的确定却受到传统培养方法的限制。由于缺少 杂交方法被用来估计不同真菌种类基因组间 对群落中所有真菌都适应的培养条件 ，大量真菌 总的相似性或检测环境样品中真菌的特殊核酸序 无法被分离培养。分离得到的有机体脱离了原有 列 ，用光密度测定法对核酸杂交所得到的阳性条 生存环境，研究结果无法准确反映原始群落结构 带或斑点进行测定得 出定量的结果 ，从而反应 出 和真菌多样性。为了克服传统培养方法的局限 环境中某种微生物的存在及功能。核酸杂交的理 性，分子生物学方法被用于真菌生态研究。直接 论基础是 DNA变性与复性动力学原理 ，即具有一 从环境样品中提取 DNA，通过分析 DNA序列 同 定同源性的2条核酸单链在一定的条件下(适宜 源性、片断多态性来确定环境样品中真菌的种类 的温度及离子强度等)，可按碱基互补原则退火形 和数量。聚合酶链式反应 (PCR)技术及 以此为基 成双链 。核酸分子杂交的序列同源性主要以杂交 础的核酸杂交、序列分析、DNA指纹分析，如限制 百分率和杂交复合体的热稳定性来衡量。两种生 性片段长度多态性 (RnP)、末端限制性片段长度 物之间的亲缘关系越近 ，它们之问所共有的多核 多态性 (T—RFLP)、随机扩增片断多态性 (RAPD)、 苷酸相 同序列就越多，即同源百分率越高_4]。用 扩增片段长度多态性(AFLR)、变性梯度凝胶 电泳 整个基因组进行的核酸分子杂交，除近似种以外， (DGGE)、温度梯度凝胶电泳技术(qV,GE)、单链构 其余的序列同源性都较低。因此基因组杂交主要 · 基金项目：森林生态系统木材腐朽菌多样性研究 (3~25042) 作者简介 ：李 娟 (1980．)，女，硕士研究生 ，主要从事森林生态系统中木腐菌多样性研究。 收稿 日期 ：2005．02-05 -·通讯作者：李 娟．E—mail：juar~li．student@sina．coin 维普资讯 第 3卷 第 1期 李 娟：几种主要分子生物学技术在真菌生态学研究中的应用