大花惠兰石斛兰的组织培养.docVIP

大花惠兰、石斛兰的组织培养 　（1）　材料与方法 材料：大花蕙兰大花品种嫩芽。将母株放在温室内盆栽培养,于2～5 月陆续从母株上取8 cm 左右的新芽,剥去最外几层叶片,去芽的上半段，然后在超净工作台上采用三步灭菌处理法处理:先在70 %的酒精中处理6 s ,立即投入10 %的次氯酸钠溶液中10 min ,稍加摇动,取出后用无菌水冲洗,剥去外层2～3 枚叶片;再放入5 %的次氯酸钠溶液中5 min ,取出后无菌水冲洗,剥至最后1 枚叶片;再放入1 %的次氯酸钠溶液中1 min ,取出后无菌水冲洗数次。以上次氯酸钠溶液中均加入Tween20 以利杀菌剂更有效地发挥作用,在无菌条件下剥出约5 mm长地茎尖,以生长点为中心,用解剖刀把茎尖切成4 个小方块,分别接入已经准备好的培养基上。 培养基： 原球茎诱导培养基配方: MS + 0. 5 mg/ L BA +1. 0 mg/ L KT + 2 g/ L 活性炭（active carbon，AC）。 原球茎增殖培养基配方为:MS + 0. 5 mg/ L BA + 0. 8 mg/ L2 ,42D +2 g/ L AC,。 幼苗分化及生根养基配方为:MS + KT 1 mg/ L + NAA 0. 5mg/ L +2 g/ L AC。 培养条件 培养基pH 5. 4～5. 8 ,琼脂粉0. 6 %～0. 8 %,活性炭0. 2 %的,防止褐变,培养室温度22～25 ℃,相对湿度40 %,光照12 h/ d ,光照强度为2 000 lx。 结果观察 原球茎诱导：把茎尖切成的小块,接入圆球茎诱导培养基上，20天后（或更长时间）观察有无圆球茎出现。结果调查:圆球茎的诱导率= 产生圆球茎的茎尖数/ 接种茎尖数×100 %。 　 原球茎增殖：将诱导形成的较大原球茎块切割成直径3～8 mm左右的小块,接种在圆球茎增殖培养基上。1 个月后统计增殖量，结果调查:原球茎增殖率= 有新原球茎的块数/ 接种块数×100 %。 　 幼苗分化及生根：将增殖的充分成熟的较大原球茎块切割成直径3～8 mm的小块,接种在原球茎分化及生根培养基上。45 d 后统计分化率、生根率及根系生长状态。结果调查:幼苗分化率= 出芽数/ 圆球茎个数×100 %。幼苗生根率= 生根幼苗数/ 幼苗数×100 %。 壮苗、驯化与移栽：壮苗。1/2MS，7 %琼脂, pH 5.4～5.6，5～6周后植株长出粗壮的根系。光照2 000 lx；容器：23 cm ×30 cm ×8 cm四周镂空的塑料框；将瓶苗从培养室(恒温室)移至与外界相通的室内放置2 d后,去瓶盖炼苗3 - 7 d,洗净瓶苗根部的培养基,用1000倍甲基托布津或多菌灵浸泡组培苗根部,放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白变软,即可用于移栽；基质。水苔和谷(麦)壳2：河沙1：珍珠岩1（体积,是大花蕙兰组培苗假植的理想基质；白天平均温度在20 ℃以上,夜间温度在15 ℃左右。假植相对湿度控制在80%以上。晴天上午10: 00至下午5: 00,作70%的遮荫处理，大花蕙兰刚出瓶的植株很小、十分脆弱, 放置处要求光照弱，种后用喷雾器将苗株与植材喷洒到湿润为止。每天向叶片喷水数次, 保持湿润, 切忌过干或过湿。10 天后才逐渐增加给水量。良好的浇水管理措施、可大大提高瓶苗移栽成活率。瓶苗移栽20 天以后新根长出, 可逐渐增加光照强度。每周进行1 次根外追肥，可用“花宝1 号”或“通用肥”2000 倍液喷洒。 3）讨论 在原球茎增殖的继代培养中,20～25 d 继代1 次较为合适,此时产生的原球茎未充分成熟,增殖率较高,且颜色为鲜绿色;30 d 以后新生的原球茎充分成熟,增殖率会有所降低,颜色转为深绿色;原球茎切割块的大小以直径0. 5 cm为适宜,过小易死亡降低增殖率,过大增殖率也有所降低；在培养基中加入2 g/ L AC活性碳可以有效的降低褐变率；分化及生根培养时原球茎切割的块越大分化的越早,幼苗长得越壮;同一培养基中培养的时间越长分化率越高;分化和生根可以同步进行。 （4）实例 大花蕙兰杂交新品种‘西维亚’、‘玛利莲梦露’、‘蒙米拉丝’、‘女皇’为材料，把母株放在温室内盆栽培养,于2 月底～4 月初陆续从母株上取8 cm 左右的新芽,从基部切离,用自来水冲洗,再用洗洁净溶液浸泡5 min ,自来水冲洗10 min ,剥去最外几层叶片,并剪去芽的上半段. 然后在超净工作台上采用3 步灭菌处理法处理:先在70 %的酒精中处理6 s ,立即投入10 %次氯酸钠溶液中10 min ,稍加摇动,取出后用无菌水冲洗,剥去外层2～3 片叶; 再放入5 %的次氯酸钠溶液