细菌的培养与接种技术.ppt

细菌的分离培养与接种技术 同济医院检验科 细菌实验室 进行细菌学实验的场所，标本的接种、培养、分离、鉴定、药敏等工作在此完成。 细菌室要防止外界污染，还要避免细菌播散。 配备紫外灯、消毒剂等。注意定期消毒。 对无菌物品和标本应明显分开放于指定位置，同时要对用过的物品及时进行灭菌处理。 保证细菌室的温度。 无菌实验室 是细菌实验室内用于无菌操作的小室，要求更严格。 完全封闭，应有缓冲区。 用前要用紫外灯消毒30min,定期用甲醛熏蒸消毒。 仅限于分装培养基及传染性强的细菌接种。 要保证本室的无菌状态。 保证本室的温度。 无菌实验室可用超净工作台代替。 培养基 常用玻璃器材的准备 培养基的成分和作用 培养基的种类 培养基的制备 培养基的成分和作用 培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。 (1) 营养物质：蛋白胨(氮源)、肉浸液（氮源和碳源）、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类 (2) 水 (3) 凝固剂：琼脂、明胶 (4) 抑制剂：非生长必需，而是选择、鉴定及判断结果的需要 (5) 指示剂：便于观察细菌 培养基的种类（按用途分类） 基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板 营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA） 选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板 增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。 厌氧培养基：用于培养厌氧菌 培养基的种类（按物理性状分类） 液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。 半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂，用于观察细菌的动力。 固体培养基：含2％～2.5％琼脂，多用于细菌的分离培养。 培养基的制备 玻璃器皿的消毒灭菌 制备的程序 调配 溶化 矫正pH 过滤澄清 分装 灭菌 鉴定 保存 细菌接种的基本程序 细菌接种法 平板划线接种法： ★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 ★方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本 连续划线法：适用于含菌量较少的标本 液体培养基接种法 穿刺接种法 :用于观察细菌动力 斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数 分区划线法 连续划线法 细菌培养法 一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等 细菌在固体培养基中的生长现象 菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 菌 落 菌落与菌苔 * * 灭菌接种环 沾取标本 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环