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细胞培养技术 药物科学与技术学院 ——周立军 参考书目 《细胞培养》，世界图书出版公司，1996年 《培养细胞学与细胞培养技术》 ，上海科学技术出版社，2004年 本次课内容细胞培养的基本知识 一、绪论 培养法的种类、培养法的发展、细胞培养的常用术语、培养细胞的作用及意义、培养法的应用 二、培养细胞的特征 培养细胞的生长方式和类型、 培养细胞的生长特点和生长增殖过程、 细胞培养的条件及影响因素 一、绪论 细胞培养（cell culture) 细胞培养技术是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。 即：从活体中取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。 涉及有细胞生物学、生物化学与分子生物学、动物学与植物学、病原学、肿瘤学、遗传学、生物工程学甚至光学、物理学等等学科。因其涉及面很广所以已经渗透到生命科学的各个领域。 组织培养的概念 组织培养（tissue culture）： 其本意是指从体内取出组织和细胞，模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。 器官培养（Organ culture）： 指的是应用和组织培养相似的条件，培养的是器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法，以上三个层次的培养，又可统称之为体外培养（in vitro）。 培养法的种类 体外培养 细胞培养 组织培养 器官培养 细胞培养可分为群体培养和克隆培养两种。 群体培养（mass culture）：即将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。 克隆培养（clone culture）：即将少数细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。 原代培养第4天，成纤维样细胞散布于培养瓶底，个别集落形成，细胞围绕中心漩涡状排列﹙×100﹚ 原代培养第7天，多个集落形成并融合﹙×100﹚ 培养法的发展 组织培养法的发展经历近百年。 德国人Roux（1885）用温生理盐水体外培养鸡胚组织并存活数月被认为是组织培养的萌芽试验。 1903年Jolly用盖片悬滴培养法，培养蝾螈白细胞生活一个月，提示组织或细胞离体后，在人工培养条件下，仍能生存。 培养法的发展 关于神经轴突的结构和形成有争议。 哈里森（生理学家）首先解剖了蛙胚的原始脊髓节段在淋巴液中进行培养。 在显微镜下观察到从神经芽细胞延伸出神经轴突的状况。 建立起一套合理的无菌培养技术 ——哈里森悬滴培养法 哈里森悬滴培养法 卡氏瓶的发明 Carrel用反复传代的方法使细胞系存活34年。他采用的无菌技术，以及后来设计的培养瓶（卡氏瓶，Carrel flask）等都是对组织培养的重要贡献。特别是他的连续培养，为后来的传代培养奠定了基础。 1923年，Carrel设计了卡式瓶培养法，扩大了组织的生存空间。 1924年Maximow的双盖片培养法，使之更易于传代和减少污染。 组织培养常用术语 原代培养（primary culture）：从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的培养。 传代培养（passage culture）：将细胞以一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代培养。 注：传代（passage，subculture） 原代培养 胎儿细胞培养比成人容易；成体组织中成纤维细胞、肾上皮细胞比较容易，上皮细胞培养难。 细胞间的分离酶：胰蛋白酶、胶原酶、 单一种类细胞的分离培养：根据培养条件——培养基、细胞接着面的条件、接着速度、离心法等。 细胞系（cell line）：原代培养经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。 细胞株（cell strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的特殊性质或标志，并能稳定保持这些特性的培养物。 克隆（clone）：指单个细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体。 对细胞培养技术的评价 优点： 1、活细胞： 能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动； 2、可控制： 选择对象：均一性、重复性（类型、性质、阶段） ； 调节条件：各种因素（物理、化学、生物等因素）； 利用方法：