2b.毛细管电泳.ppt

4) 电化学检测器（EC） EC可避免光学类检测器遇到的光程太短的问题，故和LIF同为CE中灵敏度最高的检测器。报道最多的是电化学伏安检测器，常用碳纤维微电极进行单细胞极微量神经递质(如多巴胺等)的测定。可用脉冲伏安法测定糖、糖肽及金属离子，也可用循环伏安法，另一类常用的EC为电导检测器，Li＋的检测限达10-7mol/L(10-15mol)。 5) 化学发光检测器(CL) CL具有结构简单、灵敏度高的特点，近年来引起重视。用CE—CL检测血红蛋白，其检测限比CE—UV低约4个数量级。应用最多的仍是鲁米那(luminol)体系，因为该体系对多数待测物如一些金属离子、氨基酸及其衍生物的检测灵敏度很高，且反应在水相进行。电致化学发光(ECL)也已成功地用作CE检测。  6) 其它检测器 采用激光作激励源的除LIF外，还有激光热透镜检测、激光光热检测和激光拉曼检测等。普通荧光检测器研究集中在开发新的荧光染料，以提高灵敏度。同位素检测器具有高选择性和高灵敏度〔可达10-9加mol/L〕，但测定时需经同位素标记步骤，故应用受到限制。 总之，检测器是CE中具有挑战性的研究工作。CE/MS联用是最有应用价值的检测器，但价格昂贵，不易推广。发展新型检测器、提高UV等检测器灵敏度，以及发展CE和其它分离方法、检测方法的联用是CE研究重点之一。 Light source (-) (+) - - - - - - - - - - - buffer buffer 毛细管电泳—间接紫外检测法测定植物中的低分子量有机酸 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + EOF - + - - - - - - - 苋菜根、茎、叶样品溶液电泳图 1 甲酸 2 苹果酸 3 柠檬酸 4 琥珀酸 5 戊二酸 6 未知峰 7 乙酸 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 仪器流程与主要部件 电压：0～30kV； 分离柱不涂敷任何固定液； 紫外或激光诱导荧光检测器； （可检测到：10-19～10-21 mol/L） 1.高压电源 （1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源； （2）具有恒压、恒流、恒功率输出； （3）电场强度程序控制系统； （4）电压稳定性：0.1%； （5）电源极性易转换； 2. 毛细管柱 （1）材料：石英：各项性能好；玻璃：光学、机械性能差； （2）规格：内径20～75μm，外径350～400μm；长度=1m 3.缓冲液池 化学惰性，机械稳定性好； 4. 检测器 要求：具有极高灵敏度，可柱端检测； 检测器、数据采集与计算机数据处理一体化； 类型 检测限/mol 特点 紫外-可见 10-13～10-15 加二极管阵列，光谱信息 荧光 10-15～10-17 灵敏度高，样品需衍生 激光诱导荧光 10-18～10-20 灵敏度极高，样品需衍生 电导 10-18～10-19 离子灵敏，需专用的装置； CE具体操作步骤： 毛细管电泳的基本步骤包括清洗毛细管、更换电泳缓冲液、进样、电泳并同时在线检测。 1).清洗毛细管 对于一根新的或久未使用的毛细管，需用1mol/L的NaOH溶液、0.1mol/L NaOH溶液、超纯水依次清洗。在有些情况下还需用0.1mol/LHCl、甲醇或去垢剂清洗,强碱溶液可以清除吸附在毛细管内壁的油脂、蛋白质等，强酸溶液可以清除一些金属或金属离子，甲醇、去垢剂可去除疏水性强的杂质。 在进行每次分析前可用相当于毛细管总体积2~3倍的0.1mol/L的NaOH溶液清洗一遍，一般为2~3 min，而后注入电泳缓冲液，以保证分析结果的重复性。 2). 更替电泳缓冲液 在进行每次分析前可用相当于毛细管总体积2~3倍的0.1