葛根素对MCF-7细胞的雌激素样促增殖作用.pdf

药物研究 葛根素对MCF一7细胞的雌激素样促增殖作用※ 张永旺 李灵芝 木 龚海英 吕 琪 董 培 【摘要】目的 以乳腺癌细胞株MCF．7为靶细胞，考察葛根素对其细胞形态及增殖的影响。方法 以人乳腺癌细胞 株MCF．7为靶细胞，以雌酚酮 IX10molL／为阳性对照，同时设空白对照组，葛根素干预组分为 IX10一mol／L、1X 10。。mol／L、1X10-6mol／L三个浓度组。①调整细胞浓度为4X104个L／，接种于 l2孔培养板上。48h后，倒置显微镜 下观察细胞形态变化。②调整细胞浓度为2X10个几，接种于96孔培养板，采用四唑盐法测定各孔的吸光度，计算 平均增殖率。上述实验每组均设8个复孔。③调整活细胞浓度为0．9X10个m／l，接种于24孔培养板。24h后，每组 设 12个复孔。每天随机从每组细胞中各选出3个孔，染色后在光镜下计数活细胞数，取平均值。连续计数 3天，以 时间为横坐标，活细胞数为纵坐标，作图得细胞生长曲线。结果 经葛根素 1X10一mol／L、1X10molL／处理后第 1 天、第 2天和第 3天，与空白对照组相比，增殖速度均加快。结论 葛根素可剂量依赖地促进MCF一7细胞的增殖， 提示其具有弱雌激素样作用。 【关键词】葛根素／药理学；乳腺癌细胞／药物作用；细胞培养：细胞增殖／药物作用 葛根素是中药葛根的主要有效成分，其结构与 1．1_2 主要试剂及设备 SW-LZ．ZFO 型超净工作 植物性雌激素大豆异黄酮极其相似。推测其可能与 台 (中国苏州)；Forma3111型CO2培养箱 (美国)； 大豆异黄酮一样具有弱雌激素活性。本实验以雌激 CK．40型 OLYMPUS倒置光相差显微镜 (日本)； 素依赖性乳腺癌细胞株MCF．7为靶细胞，考察了不 Bio—Rad550型酶标仪 (美国伯乐公司)。 同浓度的葛根素对乳腺癌MCF．7增殖影响，以研究 1．2 方法 葛根素的雌激素活性。 1．2．1 实验分组 乳腺癌 MCF．7细胞体外培养于 1 材料和方法 完全 n—MEM 培养基中，培养基 内含 15％胎牛血 1．1 材料 清、2．2g／LNaHCO3、25mmol／Lhepes、100ug／ml青 1．1．1 细胞株、药品及试剂乳腺癌MCF一7细胞由武 霉素、100ug／ml链霉素。置 37~C、5％CO2培养箱 警医学院细胞生物教研室提供，购 自北京大学细胞 中培养。 培养实验室。葛根素 (Puerarin)购 自中国药品生物 1．2．2 细胞形态学观察 取对数生长期生长状态 良 制品检定所，雌酚酮购 自浙江仙居制药厂。a．MEM 好的乳腺癌MCF．7细胞，用 0．25％胰蛋白酶消化， (MinimumEssentialMediumAlphaModification) 加完全 Ⅱ．MEM培养基吹打混匀，制成细胞悬液， 培养基购 自Gibco公司；胎盼蓝、3．(4，5．二甲基 染色，计数，调整活细胞浓度为 4×10个／ml，接 噻唑．2)一2，5-二苯基．四唑氢溴酸盐 (MTT)、胰蛋 种于 12孔培养板。培养板内事先放置 1．5×1．5cm 白酶 (Trypsin)、Hepes为美国Sigma公司产品；胎 大小灭菌玻片。待24小时细胞完全贴壁后设空白对 牛血清 (FBS)购 自中国医学科学院血液学研究所； 照组、雌酚酮 lX10{molL／阳性对照组和葛根素干 氨苄青霉素 (Ampicilinsodium salt)、链霉素 预组 1X10一mol／L、1X10。mol／L、1×10。6mol／L组， (Streptomysin)均为美国Amresco公司产品；二乙