葛根素注射液对高糖培养成骨细胞保护作用的研究.pdf

· 3l8 · 中国中医药科技2012年7月第 19卷第4期 July2012Vo1．19No．4 葛根素注射液对高糖培养成骨细胞保护作用的研究冰 李永华 潘寒松 梁一民 (浙江省台州市第一人民医院骨科 ·台州318020) 摘 要 目的：探讨葛根素注射液对高糖培养成骨细胞的保护作用，为临床治疗糖尿病骨质疏松提供实 验依据。方法：体外分离培养成骨细胞，并随机分为正常培养基组、高糖培养基组和高糖培养基添加葛根 素注射液组。3组成骨细胞各 自培养48小时后进行形态学观察，同时检测其碱性磷酸酶(ALP)表达的阳 性率。结果：高糖培养组成骨细胞增殖分化能力减弱，细胞数量及连接减少，其碱性磷酸酶(ALP)阳性率 也明显低于正常组；葛根素组上述指标均明显改善。结论：高糖可影响骨组织代谢及成骨细胞的增殖分 化 ，葛根素对上述改变有一定的保护作用。 主题词 葛根素注射液／药理学 成骨细 药物作用 体外研究 骨质疏松糖尿病性骨质疏松症 (Diabeticosteoporosis， 培养皿内。并以约5×10／cm 的密度接种于培养瓶中，放 DOP)随着糖尿病发生率的增加而相应增加，研究表明糖尿 入 37~C，5％CO2培养箱内培养 ，每2～3天换液 1次。 病骨质疏松症患者存在骨量减少 、骨密度降低等病理改 1．2 分组处理 待细胞长满后进行传代 ，使用第3代细胞 变…，目前尚无有效治疗方案。I临床研究表明，葛根中含有 随机分为正常组、高糖组(葡萄糖浓度 100mmol／L)和高糖添 多种异黄酮成分，包括葛根素、大豆苷和大豆黄酮等，这些异 加葛根素注射液组(葡萄糖浓度 100rmnol／L+葛根素注射液 黄酮成分有明显的降糖和降脂作用 J，同时也能改善患者 40p~mol／L)，分别培养48小时。 骨质代谢，对于骨质疏松具有明显的防治作用，临床观察亦 1．3 形态学及APL 阳性率观察 培养48小时后将贴壁细 证实葛根素可明显减轻糖尿病骨质疏松症状 J，但其确切 胞用4％多聚甲醛固定，而后 PBS洗涤3次，常规 HE染色 ， 机制未明。为此 ，本研究拟通过高糖培养成骨细胞 ，并同时 在显微镜下 (Olympus)观察成骨细胞形态。同时按 比例配 添加葛根素注射液 ，观察其对高糖环境下成骨细胞的保护作 制BCIWNBT染色工作液 ，48孔板每孔加 100 上述 BCIP／ 用，并研究其可能的作用机制。 NBT染色液，室温避光孵育5—3O分钟，直至显色至预期深 1 材料与方法 浅，去除工作液，用蒸馏水洗涤终止显色。在 100～200倍倒 1．1 成骨细胞培养 取出生24小时内的SD大鼠的颅骨， 置显微镜下，计数每孔成骨细胞样细胞数，并计数各组细胞 彻底剥离骨膜等软组织 ，置入含 DMEM培养液的培养皿中 ALP染色阳性率。 修剪成 1～3mrn3大小的骨片，加入胰酶在37℃环境下振荡 1．4 统计学方法 数据处理采用SPSS15。0软件进行 ，3组 消化2～3分钟，再加入等体积的含 15％胎牛血清DMEM终 间计数资料比较采用 检验进行两两比较，设 P0．05为 止消化。吹打细胞，收集消化液，在4~C，1000r／min条件下 差异有统计学意义。 离心 l0分钟使细胞沉淀。沉淀细胞放置于含 15％胎牛血 2 结果 清DMEM培养基 (含青霉素 100U／ml、链霉素 lOOt~g／m1)的 2．1 各组成骨细胞形态学观察 见图1。 正常组 高糖组 高糖 +葛根素组 图1 各组成骨细胞形态观察 (×400) 正常培养基组：成骨细胞可见大部分细胞贴壁，初时细 大，居中。高糖培养基组成骨细胞呈扁平或星形，胞质嗜碱 胞形状呈多边形 、梭形 ，随着培养时间的延长，细胞伸出较多