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动物的克隆 一、教学目标: 1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用 2、简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用前景 3、举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用 二、教学重点和难点: 1.动物细胞培养的过程及条件 2.用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 3.单克隆抗体的制备和应用 动物细胞的培养过程 有关概念: 原代培养:从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养:将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养。 细胞系:连续细胞系和有限细胞系 细胞株:连续细胞株和有限细胞株 动物细胞融合 细胞融合与融合诱导细胞融合物质: 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 二、单克隆抗体 B淋巴细胞与抗体的关系: 单克隆抗体 如何大量生产单克隆抗体? 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 1.动物细胞全能性的表现程度 受精卵胚胎细胞多能干细胞单能干细胞高度分化的细胞 低等动物细胞高等动物 2.体细胞克隆羊克隆成功的证明了: (1)高度分化的细胞经过一定技术处理,也可回复到类似受精卵时期的功能 (2)细胞质具有调控细胞核发育的作用 3.克隆羊获的成功的部分原因(分子细胞学的解释): 思考讨论:在动物细胞培养过程中, 为什么要用胰蛋白酶对取出的动物 组织进行处理? 植物组织培养和动物细胞培养的比较 思考下列问题: 1、什么叫动物细胞融合?植物体杂交技术与动物细胞融合有什么不同呢? 2、动物细胞在结构上有何区别?这与它们杂交或融合过程有什么影响? 3、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同?两者的融合过程是否也一样? 3.动物核移植实验和动物的克隆繁殖 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移如入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体. 核移植技术 1.克隆羊培育过程 黑面绵羊去核卵细胞 白面绵羊乳腺细胞核 细胞核移植 重组细胞 电脉冲刺激 早期胚胎(第三次分裂) 胚胎移植 另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 克隆羊多利 多利羊 4.克隆动物的应用前景(意义) 1.动物细胞工程技术的基础是:( ) A.动物细胞融合 B.胚胎移植 C.动物细胞培养 D.核移植 C 胰蛋白酶处理动物组织,可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解,获得单个细胞。 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 获得细胞或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株 培养目的 葡萄糖 动物血清 蔗糖 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 细胞的全能性 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 * 一、动物细胞的培养和克隆的形成 三、动物的克隆繁殖 二、动物的细胞融合技术和应用 知识结构 一、动物细胞的培养和克隆的形成 一、动物细胞培养 1.发展历史: 20世纪初,人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的,还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年,美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织,把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周,并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题,而且开创了动物组织培养的先河。此后,在许多科学家的不懈努力下,动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 2、动物细胞培养的各层次概念: 动物细胞培养: 器官培养: 动物组织培养: 组织培养 3、动物细胞培养过程: 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 (分解弹性纤维) 细胞系 选择 细胞株 幼龄动物 取动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 4.克隆培养法: 1.概念: 2.基本要求 3.提高克隆形成率的措施 4.细胞克隆的最主要用途 把一个细胞分离出来培养,使之繁衍成一个新的细胞群体。叫克隆培养法或细胞克隆 保证分离出来的细胞是一个 从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系。…… 4.动物细胞培养技术的应用: 1.蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、
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