DNA分子标记技术在中药鉴定中应用.pdfVIP

中华中医药学会2014年医院药学分会学术年会、世界中联中药专业委员会2014年国际学术会议暨北京药师协会慢病麟台药学专业委员会成立大会 -综述· DNA分子标记技术在中药鉴定中的应用 田 爽(天津中医药大学第二附属医院药学部 300150) 摘 要 分子生物学技术在中药鉴定中应用研究方兴未艾。综述了DNA分子标记的类别及DNA分子标记技术在 药材道地性研究、中药质量标准化等方面的研究进展。 关键词 中药鉴定：DNA分子标记；分子生物学技术 中药材是中药饮片、中药提取物和中成药的 纹、核酸序列分析的三大DNA鉴定技术体系 原料，中药材的准确鉴定是中医药事业运行和发 [23。 展的基本环节，一直备受关注。药材市场处于动 (1)限制性片段多态性[3]，即RfLP， 态变化中，基原变化和新的药材类型(如栽培品、 是根据不相同植物的个体来源DNA构建的不同 进口品种、新的中药材品种等)不断出现，都对 的谱带模型和低拷贝的DNA探针杂交产生的 鉴定工作提出新的要求。 DNA限制性片段多态性，这表明基因组DNA 早期中药鉴定方法包括来源、性状、显微和 是在限制性内切酶完全消化后所产生的片段长 理化鉴定四大鉴别法。最近10年来，遗传标记 度上的差异。 技术普遍应用到中药的质量鉴定研究中，一般应 (2)随机扩增多态性，即RAPD，其原理 用于动、植物药材的鉴定。中药鉴别所依据的遗 通过DNA的聚合酶链反应技术(PCR)，应用通 传标记主要有形态标记、生化标记(包括免疫学 过人工合成产生的随机引物，通过植物的组织分 标记)、组织细胞标记。这些标记都是基因表达 离形成的基因组DNA为模板，进行多态性的 的产物，易受生理状态、生长环境、贮藏加工、 DNA片段所进行的随机合成反应，通过DNA 生长期、品种等的影响，且标记数目有限，急需 片段将植物的不同基因组进行区分。 新的遗传标记技术。自从Bostein和White等于(3)DNA条形码，是指利用基因组中一 段公认标准的、相对较短的DNA片段作为物 1980年利用RFLP作为遗传标记[1】，开创了直 接应用DNA多态性发展遗传标记的新阶段。近 种标记而建立的一种新的生物鉴定方法，由加拿 年来，随着分子生物学技术的进步，DNA分子 大分类学家Paul Hebert·于2003年首次提出 标记的新技术不断涌现，DNA分子标记技术在 [4]。该方法通过筛选确定通用条形码，建立条 中药的应用报道逐渐增多。传统鉴定方法主要依 形码数据库和鉴定平台，通过生物信息学分析方 据性状特征差异进行鉴定，而DNA分子鉴定技 法分析比对DNA数据，进而对物种进行鉴定。 术则依靠反映生物个体、居群或物种基因组中具 DNA条形码鉴定快速准确、有望实现自动鉴 有差异特征的DNA片段来鉴定，不受环境饰 定，是传统生物鉴定方法的有效补充，因而受到 变影响及经验的限制，在中药材品种鉴定上具有 了国内外学者的广泛关注，目前已成为物种鉴定 一定优越性。 和分类的研究热点[5—7]。与其他分子鉴定方法 1、DNA分子标记的类别 相比，DNA条形码鉴定具有三大优势：鉴定结 中药DNA分子鉴定经历了以RFLP，果可重复性良好；方法通用性强：可构建统一数 RAPD和DNA 据库和鉴定平台，易于推广和标准化。 barcoding技术为代表的3个 阶段，形成了基于分子杂交信号、PCR扩增指 2、DNA分子标记技术在中药鉴定中的应用 373 中华中医药学会2014年医院药学分会学术年会．世界中联中药专业委员会2014年国际学术会议暨托京药师协会慢扁防治药学专业委员会成