重组人胰岛素原基因在培养的大鼠肝癌细胞中基因转移和表达.pdfVIP

维普资讯 · o 242 · 理生理杂志 ChineseJournal— — fPh0卫 Z：丝(2；丝 =丝 [文章编号】 1000-4718(2007)02-0242—04 重组人胰岛素原基因在培养的大鼠肝癌 细胞中基因转移和表达 王玉霞， 袁凤 山 ， 吴志香， 杨立新， 杜 宁， 刘兆嚣 (中国医科大学附属第一医院内分泌科，辽宁 沈阳110001) [摘 要] 目的：探讨含有葡萄糖反应元件的重组人胰岛素原基因在培养的大鼠肝癌细胞中基因转移及表 达情况。方法：将含有3点突变及2点突变的人胰岛素原基因转染至大鼠肝癌CBRH7919细胞 ，测定不同葡萄糖 浓度下瞬时及用C-418筛选稳定表达后胰岛素的分泌量 ，并检测基因整合情况。结果：① 转染后38h及 1个月，不 同葡萄糖浓度下，含有3点突变胰岛素原基因的肝癌细胞胰岛素分泌量不同；含有 2点突变胰岛素原基因的肝癌 细胞，只有在25mmol／L的葡萄糖浓度培养液中，才能测出胰岛素分泌量；② 阳性克隆细胞基因组扩增出特异 目的 电泳条带，未转染细胞无此条带。结论 ：①用逆转录病毒为载体能将重组人胰岛素原基因转染到肝癌细胞中，并使 之稳定表达。② 所构建的重组人胰岛素原基因能指导靶细胞随葡萄糖浓度的变化调节胰岛素分泌。 [关键词] 葡萄糖 ；胰岛素；肝肿瘤 ；基因转移；基因表达 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Genetransferandexpression ofrecombinedhumanproinsulininhepato- macellsofrats WANG Yu—xia，YUAN Feng—shan，WU Zhi—xiang，YANG Li—xin，DU Ning，LIU Zhao．—zhe (DepartmentofEndocrinology，TheFimtAffiliatedHospitalofMedicalUniversity，Shenyangl10001，China．E—mail： wangyuxiasy@eyou．tom) [ABSTRACT] AIM：Toexploretherecombinedhumanpminsulingenecontainingglucosereactionelement(GL- RE)expressionintrnasfectedCBRH7919cells．METHODS：Thepackagedretrovirusencodinggeneticallymodifiedhu- mnaproinsulinPLXSN一(GLRE)3一BP—lMpINS3andPLXSN一(GLER )3一BP—lMpINS2weretrnasfectedinto CBRH7919cells．InsulinvaluesincellsaftertrnasientnadsteadyexpressionscreenedbyC-418atdifferentglucoselevels were detected．Chromosome DNA wasisolated from rtnasfected nad unrtnasfected cellsnad polymerasechain reaction (PCR)Wasperformed．PCRproductswerenaalyzedbyelectrophoresis．RESULTS：38hafterrtnasfection，attheglucose levelsof0—25mmol／L，thelevelsofinsulinproducedbyceilsincludingPLXSN一(GLRE)3一BP—lMpINS3were(3．5