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第六章 环境中微生物的检测 微生物因为体积小、质量轻、适应性强等特点，在自然界中分布很广。但环境条件不同，微生物的种类和数量也不同。 第一节 土壤中的微生物 一、土壤是微生物生活的良好环境 土壤中的生态环境条件——营养（有机质丰富）、水分（有一定含量）、空气（含氧气）、酸碱度（pH5.5~5.8，适宜）、渗透压（0.3~0.6MPa，等渗或低渗环境）、温度条件（较恒定）和表面保护层。 故土壤是微生物的大本营，也是人类最丰富的“菌种资源库”。 二、土壤中常见微生物类群 土壤中微生物的主要种类有： 细菌（占70～90％） 108 放线菌 107 丝状菌 106 酵母菌 105 藻类 104 原生动物 103 三、土壤中微生物的数量与分布 不同类型的土壤中微生物的种类和数量是不相同的。调查结果表明，有机质含量丰富的黑土、草甸土、磷质石灰土等的微生物数量多；栗钙土、盐碱土、红壤土、砖红壤土的微生物数量较少。（见表1） 不同土层深度的土壤中微生物的数量和种类也不同。一般土壤表层微生物数量最多，随着土层的加深，微生物的数量逐步减少。 表1 我国各主要土壤的含菌量(万/克干土) 土类 地点 细菌 放线菌 真菌 暗棕壤 黑龙江呼玛 2,327 612 13 棕壤 辽宁沈阳 1,284 39 36 黄棕壤 江苏南京 1,406 271 6 红壤 浙江杭州 1,103 123 4 砖红壤 广东徐闻 507 39 11 磷质石灰土 西沙群岛 2,229 1,105 15 黑土 黑龙江哈尔滨 2,111 1,024 19 黑钙土 黑龙江安达 1,074 319 2 棕钙土 宁夏宁武 140 11 4 草甸土 黑龙江亚沟 7,863 29 23 嵝土 陕西武功 951 1,032 4 白浆土 吉林皎河 1,598 55 3 滨海盐土 江苏连云港 466 41 0.4 1、取土样 选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。先除去表层约 2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。 盛土的容器应是无菌的。将5点样品约1kg充分混匀，除去碎 石、植物残根等。土样取回后应尽快投入实验，同时取10- 15g，称重后经105oC烘干8h，置于干燥器中冷却后再次称重， 计算含水量。 2、 倒平板 熔化已灭菌的上述4种培养基并冷却至45oC左右倒平 板，凝固待用，每种培养基每个稀释度各三只平板。 3、编号 取5支无菌空试管（15×150mm）依次编号为10-3、10-4、 10-5、10-6、10-7。 4、分装无菌水 按无菌操作用5mL移液管分别吸取4.5mL无菌水于编号的 各无菌空试管中。 5. 制备土壤稀释液 称土样1g于盛有99mL无菌水或无菌生理盐水并装有玻 璃珠的三角瓶中，振荡10～20min，使土样中的菌体、芽孢 或孢子均匀分散，此即为10-2浓度的菌悬液。用无菌移液 管吸取悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管中，用移液管吹吸三 次、摇匀，此即为10-3浓度。同样方法，依次稀释到10- 7。稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行，整个稀释 过程如图。 6、混菌法接种 细菌分离分别精确吸取10-7，10-6，10-5三个稀释度 的菌液1mL；放线菌分离分别吸取10-5，10-4，10-3三个稀 释度的菌液1mL；霉菌分离分别吸取10-4，10-3，10-2三个 稀释度的菌液1mL；酵母菌分离分别吸取10-6，10-5，10-4 三个稀释度的菌液1mL，对号加在已凝固的平板上，同时做 空白对照，空白对照只加培养基，不接种菌液。 7. 培养 将涂布后的平板上倒置于恒温箱中，细菌在37oC下培 养24～48h，霉菌在28oC下培养3～5d，放线菌在28oC下培 养5～7d，酵母菌30oC下培养2～3d,观察结果。 8. 计数 选菌落分散、菌落数适量且各平行皿菌落数