葡萄糖对鹅原代肝细胞脂质沉积相关基因及酶活性影响.pdfVIP

葡萄糖对鹅原代肝细胞脂质沉积相关基因 及酶活性的影响 黄惠兰 韩春春 王继文刘丹丹 万火福 李 亮 刘贺贺 潘志雄 (四川农业大学动物遗传育种研究所，四川成都611130) 摘 要 通过用葡萄糖培养天府肉鹅(A瑚er c增加漱)原代肝细胞的试验，探讨葡萄糖对肝细胞脂质合 成能力的影响．研究发现：o～25mmoL／L葡萄糖对肝细胞上清液中谷草转氨酶(aspartatetmnsaIllinase， AsT)、谷丙转氨酶(alanine砌iotransferase，ALT)浓度没有显著影响，35mmoL／L葡萄糖影响显著，但AsT、 ALT浓度均在正常范围内，表明肝细胞功能正常；油红氧染色实验结果表明：葡萄糖处理后显著增加细胞内 mmol／L、35 脂滴集聚和脂质沉积；25 mmol／L葡萄糖能显著增加乙酰辅酶A羧化酶仅(acetyl—CoAcarboxyl． ase acid mmoL／L、25 d，Acc仅)、脂肪酸合成酶(fattysynthetase，FAs)酶活性；5mmoL／L和35mmoyL葡萄糖 活性诱导肝细胞内脂质沉积． 关键词 葡萄糖；脂质沉积；鹅原代肝细胞 葡萄糖不仅是一个能量源，也能参与调控肝脏内碳水化合物和脂肪代谢。有研究表明，口服高剂量葡萄 糖和摄食高能高碳水化合物膳食明显促进人肝脏内脂肪酸合成。Guo等利用花青素处理人肝瘤细胞 解和脂肪生成基因都能被葡萄糖调控。已有研究表明，葡萄糖和胰岛素能够协同促进鹅原代肝细胞中三酰 甘油的沉积及生酯酶如Accd、FAs的表达。在猪脂肪细胞体外培养研究中显示，葡萄糖可以不依赖胰岛素 促进脂肪细胞生脂基因的表达和脂肪的生成。葡萄糖能否不依赖胰岛素单独诱导鹅原代肝细胞的脂质合成 还没有研究。因此，本实验以天府肉鹅原代肝细胞为实验材料，检测葡萄糖对鹅原代肝细胞脂质合成的影 响，为研究葡萄糖在鹅肝细胞脂肪变性过程中的作用提供一定的理论基础。 1材料与方法 1．1 原代肝细胞的培养 采用半原位Seden二步胶原酶灌注法分离3只天府肉鹅(A邢er c增加幽)的肝细胞。全培养基包括 EMDM低糖培养基和胎牛血清，将肝细胞接种到35 mm培养皿和6孔培养板中，静置在40℃、5％cO：气相 和饱和湿度的cO：培养箱中培养。3 h后用PBS清洗3次后更换为10％血清培养基，培养24h后换无血清 培养基，再继续24h后更换为加0mmoL／L、5mmoL／L、15 mmoL／L、25mmoL／L、35mmoL／L不同浓度葡萄糖处 理的培养基，培养48h后取样，每个处理重复3次。 基金项目：四川农业大学大学生创新性试验计划(121062604)；国家自然科学基金 已发表：《生命科学研究》2013，17(6) 103 四川省畜牧兽医学会2014年学术年会 1．2 ALT、AST含量的测定 鹅肝细胞经不同浓度的葡萄糖处理48 mL h后用2 EP管收集细胞培养液lmL，用自动生化分析仪检测 细胞上清液中AST、ALT浓度。 1．3 油红氧染色检测脂质沉积 细胞培养于35 mm的培养皿内，各组予以相应处理后，PBS洗3次，4％多聚甲醛固定30min，油红氧染 液室温染色15min，PBS漂洗2次，荧光相差显微镜下观察细胞内橘红色脂滴形成情况，并拍照。将己染色 的培养皿置于32℃培养箱内蒸发掉水分，加入l mL异丙醇，萃取20min后，用吸管移出染液，于分光光度计 510 nm波长处测吸光度反映脂质浓度。 1．4 FAS、ACC0【