糖皮质激素受体对小鼠心梗后心功能和心脏重塑的保护作用.pdfVIP

糖皮质激素受体对小鼠心梗后心功能和心脏重塑的 保护作用 硕士研究生：王吉静 导师：杜杰首都医科大学附属北京安贞医院 【摘要】 研究背景心肌梗死导致心功能进行性恶化并最终导致心衰。心肌梗死的病 理过程中伴随着心肌细胞大量死亡并触发炎症反应，过度炎症反应导致心脏重塑不良和心功 能失调加重。在心梗等应激情况下糖皮质激素(GCs)释放增加。糖皮质激素以其强大的抗 炎，免疫抑制作用被广泛应用于炎症和免疫疾病。糖皮质激素发挥其生理和药理效应主要是 通过和糖皮质激素受体(GR：NR3C1)结合。GR是一种细胞内的受体，属于核转录因子，是 核受体家族中的一员，GR对心肌细胞至关重要，心肌细胞敲除GR后，大量维持心肌细胞正 常形态和功能的基因发生改变，Gcs或GR信号通路对心梗后心脏损伤和重塑的保护作用尚 未完全清楚。因此本实验动态观察心肌细胞敲除GR后和给予地塞米松后小鼠心梗心功能和 心脏重塑过程，旨在探讨GR信号通路在心肌梗死发挥的具体作用。 研究目的利用肌酸激酶cre重组酶(MCK—Cre)小鼠和糖皮质激素受体位点(GR 表达情况，证明MGRKo小鼠可以用于研究心肌特异敲除GR的实验；通过手术结扎小鼠冠状 动脉前降支，复制小鼠心肌梗死模型：观察心肌细胞GR缺失(MGRKO小鼠)和GR激活(给 予地塞米松注射)情况下心梗后心功能，心脏损伤情况，心梗面积，心肌细胞凋亡等情况， 心脏炎症细胞和炎症因子浸润，探讨糖皮质激素及其受体对心梗的保护机制，为临床治疗寻 求可能的干预靶点。 研究方法1． 研究对象分组：第一部分实验，实验动物雄性肌肉特异性GR敲除小鼠 +Sham(n=12)，Vehicle+MI(n=18)，Dex+MI(n=18)。 Rea卜time PCR法检测MGRK0小鼠心脏组织GR的表达。 3． 心梗模型制备：手术组小鼠是通过结扎冠状动脉前降支复制心肌梗死模型，而对照 组小鼠仅穿线不结扎。 4． 心脏功能评估：采用小动物超声心动仪器测定小鼠心脏功能指标。 5．心脏组织纤维化和瘢痕大小测定：采用Masson染色方法检测组织瘢痕纤维沉积大小。 6．评价心肌肥厚指标：Hw／Bw检测心脏重量，wGA染色观察心肌横截面积大小。 7．细胞凋亡检测：TUNEL方法检测心脏组织中细胞凋亡，AnnexV／PI方法检测培养细 胞凋亡和坏死情况。 Five．C口ntinentIntema硒n8lC0l怕“≥nceonC礁#d}Ov毫害cul晷f0ise毫se of Anzhen to and30-、陪酊Annh，e俜毒ry Hosp妇I毒燕Hatede8p讳翻MedIcaIu冉-Ⅳers{母 Mee“ngBe牙in9 ～595— 8．心脏组织炎症因子表达：免疫组织化学染色检测CcL5，白介素6(IL一6)，肿瘤坏死 PCR方法检测上述炎 因子a(TNF—a)，转录生长因子B的表达(TGF—B)；rea卜tiⅢe 症因子的mRNA水平，CBA方法检测TNF—a和IL一6的蛋白水平。 9．应用PRIsM统计软件进行实验数据处理。计量资料以均数±标准差表示，分类变量 ANOVA)，P0．05认 以％表示。组间均数比较采用完全随机设计的单因素方差分析(One—way 为差异有统计学意义。 1．利用McK—cre和GR 结果 10xp—floxed小鼠杂交构建肌肉特异敲除GR的小鼠(MGRK0)， 检测MGRK0小鼠心脏组织GR表达，发现心脏组织GR表达约减少43％。 2．心梗后心脏组织糖皮质激素受体激活增加，体外培养H9C2大鼠心肌细胞系发现在缺 氧处理后，磷酸化的GR表达明显增加。 3．MGRK0小鼠心梗30天后心功能恶化较同窝小鼠加重，左心室射血分数和左心室短轴 缩短率减小，左心室收缩末期和舒张末期内径扩大，左心室收缩末期和舒张末期心腔容积扩 大。 4．心脏中减少GR表达加重心梗后心脏损伤，心梗