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miR-21调控舌鳞癌细胞凋亡的实验研究 专　业: 口腔临床医学关键词: 舌鳞状细胞癌 miR-21调控 细胞凋亡 颈淋巴转移 miRNA表达 靶向治疗分类号: R739.86　 R730.2形　态: 共 97 页　约 63,535 个字　约 3.039 M内容内容摘要 舌鳞状细胞癌(tonguesquamouscellcarcinoma，TSCC)是最常见的口腔恶性肿瘤，约占口腔恶性肿瘤的43.4%。舌鳞状细胞癌常造成患者的语言、进食等功能障碍及颜面部的畸形，严重影响患者的生存质量。舌鳞癌常常发生早期颈淋巴转移，且转移率较高。近二十年来，尽管临床上舌鳞癌的综合治疗已经很普遍，但以手术为主，放化疗为辅的综合治疗对舌鳞癌生存率的提高并不明显，5年总体生存率仍然较低，徘徊在50%～55%左右，并没有显著提高，中晚期患者的5年生存率更低，约为27%，而且这些方法都存在各自的局限性，特别是对中晚期和复发患者疗效不佳，对伴有远处转移者疗效更差。因此，寻找更安全有效的治疗途径是提高舌鳞状细胞癌生存率和生存质量所亟待解决的难题。大量的研究已经证实，人类疾病的发生发展直接和间接地与基因密切相关，因此，可以认为人类的疾病都是基因病。所以从本质上来说，舌鳞状细胞癌也是一种基因病，与细胞的生长增殖和凋亡失控等密切相关。从理论上讲，基因治疗有望解决这些问题，所以恶性肿瘤的基因治疗是近十几年来的研究热点。但长期以来人们一直不遗余力地寻找某一基因和某一疾病的对应关系，由于概念与技术的局限，把这种寻找变成了一对一的简单线性关系的研究，有“零敲碎打”之嫌，致使目前基因治疗的效果不尽人意。由于肿瘤的发生发展涉及多个编码基因的改变，只是单纯抑制某个基因的表达，难以有效地起到抑癌作用。可喜的是，人类基因组计划已于2003年4月完成全部序列测定，进入了后基因组时代即功能基因组学时代，基因组科学完成了一次历史性转折，而疾病基因组学也不断取得成果，在观念和技术上，初步实现了由“零敲碎打”向“整体阐明”的转折。舌鳞癌细胞与其它恶性肿瘤一样，其生物学特性取决于其特异表达的基因，而在肿瘤发展过程中必然伴随着不同的基因表达变化。那么，调控舌鳞癌细胞特异的基因表达及其发展过程中基因表达变化的生物学机制是什么？对于这一问题，虽然目前还没有确切的答案，但是，近年非编码RNA(non—codingRNAs)，特别是微小分子RNA(microRNA，miRNA)调控基因表达研究的兴起给回答该问题提供了新的线索。内源性miRNA可调控数十到数百个基因的表达，因此，肿瘤细胞内起到“促癌”和“抑癌”作用的非编码miRNA比编码的癌基因和抑癌基因少得多，可以成为更稳定有效的抗癌靶点。miRNAs的研究分析提示，miRNAs参与生命过程中一系列的重要进程，包括发育、造血、器官形成、凋亡、细胞增殖，甚至是肿瘤发生。在众多相关疾病中，恶性肿瘤的miRNA表达异常最受瞩目。根据高通量的miRNA微阵列和实时定量RT—PCR(quantitativereal—timePCR，qRT—PCR)分析，发现在多种人类恶性肿瘤中，包括结肠癌、乳腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、淋巴瘤、白血病等的miRNA表达谱与它们来源的正常组织存在很大区别，这种区别在低分化和恶性程度高的肿瘤组织表现得更显著些。在某些恶性肿瘤中，miRNA含量比来源的正常组织明显降低，肿瘤分化越差，miRNA的含量也越低，如在乳腺痛组织中，miR-10b、let—7、miR-125b和miR-145等的表达明显下调。而某些miRNA在肿瘤组织内的表达却有所上升，如乳腺癌中的miR—21和miR-155。恶性肿瘤miRNA表达的变化说明肿瘤细胞基因调控机制发生改变，与cDNA微阵列比较，miRNA表达谱能为癌肿的分子分期和分型提供更准确的信息。随着新的miRNA的不断发现及其功能的逐渐明确，使得miRNA的研究倍受关注，成为当前研究的热点之一。大量研究发现在癌细胞中表达异常的miRNA的靶基因属于癌基因或者抑癌基因，这些靶基因都与细胞的增殖、凋亡或分化密切相关。正是因为miRNA具有调节癌基因或者抑癌基因表达的功能，故其自身也充当着“抑癌基因”和“癌基因”的角色。然而在头颈肿瘤，特别是以舌鳞癌为代表的口腔鳞状细胞癌中相关miRNA及其功能的研究未见报道。本研究采用高通量的miRNA微阵列筛选出不同分期的舌鳞癌组织和癌旁正常组织中差异表达的内源性miRNA，获得舌鳞癌细胞的miRNA表达谱；选取在早期和中晚期舌鳞癌中都显著高表达的miR-21为进一步研究对象，通过qRT-PCR验证其在50例不同分期舌鳞癌组织中的差异表达；同时采用免疫组织化学方法检测miR-