伪狂犬病病毒上海株(PRV-SH)gE-gIGFP+缺失株的构建【荐】.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’( )! 1’ ) # 年 月 $%% $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,-./-0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 伪狂犬病病毒上海株（ ） ) $ . 缺失株的构建 !#$% ’( * ’+ * ,-! # $ # 姜 焱 侯玉峰 陈溥言 # （南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室 南京$#%%2 ） $ （南京出入境检验检疫局 南京$#%%%#） 摘 要：在构建了含伪狂犬病病毒（ ， ）上海株 基因和 基因克隆鉴定 ?@+.A’-/,7+@ 7-.@ ?B :C :5 的基础上，采用酶切的方法构建了载体D:5C。然后用限制性内切酶!#EC 和!$%DC 缺失掉:5 基因 ’端 ，同时把绿色荧光蛋白（ ）基因表达盒插入到缺失部分，并在下游引入一个 F,D G*? 多克隆位点，构建了缺失转移载体D:5C4G*?。用HIJK? 转染试剂盒将D:5C4G*? 转染了感染 ?B4LE 的MEN4$# 细胞，待出现O% P 病变后收获病毒，并以蚀斑法得到纯化的缺失了:5Q :C 重组病毒株。小鼠试验证实了缺失株的毒力有所下降。 关键词：伪狂犬病病毒，转移载体质粒， R R S 缺失株，绿色荧光蛋白（ ）表达盒 :5 Q :C Q G*? G*? 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） T2 K %%%#4F$%2 $%% %#4%%#4%F 伪狂犬病病毒（ ， ）是引起多种家畜和野生动物以发热、流产和死 ?@+.A’-/,7+@ 7-.@ ?B ［］ 亡、奇痒及脑脊髓炎为主要症状的一种疱疹病毒 # 。基因组为线状双股H1K，核酸长度约 #%U, 。猪是该病毒的主要宿主及传染来源。伪狂犬病对养猪业已造成了巨大的经济损 ［］ 失$ 。各种灭活苗及弱毒疫苗的使用在对该病的防治中起到积极作用，但随着对该病研 究的深入，发现利用常规疫苗对该病根除、持续感染的防治是不成功的。随着分子生物学 的发展，人们已能对一些病原的基因进行改造，使其失去致病作用。国内外对?B 分子 生物学方面的研究越来越深入，已确定了主要毒力基因。其中， 是一个重要的毒力基 :5 ［］ 因 ，而 也与毒力有关。它们与 在神经系统中的侵袭和扩散作用密切相关。据 :C ?B ［］ ! 等 报道， 决定毒力的部分是第 位的缬氨酸和半胱氨酸，只要缺失这 V/=’,@ :5 #$ W #$F 两个