牛奶中酪蛋白和乳糖的分离与鉴定.doc

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离与鉴定 汪莉，孙哓艳 （武汉大学 化学与分子科学学院，湖北，武汉 430072） 摘要：通过调节牛奶的等当点使其中的酪蛋白沉淀出来，并通过将乙醇 混入乳糖水溶液中，使不溶于乙醇的乳糖结晶出来，从而将牛奶中的酪蛋白和乳糖分离出来，并通过缩脲反应，茚三酮反应，浓硝酸反应（黄色反应）对酪蛋白进行鉴定，并通过测定乳糖水溶液的旋光度进行鉴定。 关键词：酪蛋白 乳糖 等电点 旋光 电泳 设计实验 牛奶是一种均匀稳定的悬浮状和乳浊状的胶体性液体，是一种营养价值丰富且易被人体吸收的物质。现代研究表明，牛奶中所含的水，蛋白质，脂肪，乳糖，无机盐，维生素等都容易被人体吸收利用，除具有较高的营养价值外，对一些疾病还有一定治疗作用和保健养老作用。 酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，是含磷蛋白的复杂化合物。蛋白质是两性化合物，当调节牛奶中的PH值和温度达到酪蛋白的等电点时，蛋白质所带正、负电荷相等，呈电中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会从牛奶中沉淀出来。由于酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，以此两种溶剂可除去酪蛋白中的脂肪。本实验以此分离酪蛋白，并采用各种实验方法对酪蛋白进行鉴定。 乳糖是一种二糖，而且是还原性糖，大部分以乳α-乳糖和β-乳糖两种同分异构体型态存在，α-乳糖的比旋光度[α]20D =86 ? ，β-乳糖的比旋光度[α]20D ==35 ?在水溶液中两种乳糖可互相转变，因此水溶液中有旋光现象。乳糖不溶于乙醇，当乙醇 混入乳糖水溶液中，乳糖会结晶出来，从而达到分离目的。 通过学生自查文献，拟订实验方案，通过探索，改进实验条件部分成功的完成了实验。 实验部分 1.1实验药品 冰醋酸，乙醇，乙醚，伊利纯牛奶（净含量250ml），碳酸钙，滤纸，硫酸铜，氢氧化钠，茚三酮，浓硝酸，考马斯亮蓝R，醋酸钠，巴比妥缓冲液。 1.2实验仪器 数字旋光仪，数字恒温水浴槽，DYY-III形稳压电泳仪，抽气吸滤瓶，布氏漏斗，蒸发皿，烧杯50 ml 、100ml 容量瓶25ml ,表面皿，50ml量筒，精密PH试纸PH=3-5，滤纸 1.3酪蛋白鉴定反应 缩脲反应： 紫玫瑰色 茚三酮反应： 蓝紫色 浓硝酸反应： 1.4实验操作步骤 （1）酪蛋白的分离 取30ml新鲜的牛奶，在恒温水浴中加热至46?C，边搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液，细细观察至牛奶中出现大量的块状沉淀，停止加入醋酸溶液此时牛奶的PH为4.4。放置冷却、澄清后过滤酪蛋白，保留回收滤液（为乳糖的分离作准备）依次用乙醇、乙醇和乙醚的等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白，去除脂肪，待酪蛋白干燥后称量得1.2178g产品，并计算牛奶中酪