分离胶真空采血管在DNA实时荧光定量PCR分析中应用.pdf

一 李朝晖 郑锦利 刘 洁 (福建医科大学附属闺东医院检验科，福建福安355000) 分离胶真空采血管由于分离胶界于血清与血细胞之间， 中并加入等量DNA浓缩液，其余操作步聚按试剂说明书进 可有效保护血清成分以及其分离血清效果优于无任何添加 行，两组检测结果(对数表示)如表3和图1所示。 剂的真空采血管的优点，广泛应用于血清生化学试验、免疫 2结果 检测、药物检测等，但分离胶真空采血管用于HBV—DNA实 时荧光定量PCR检测是否适用，Donald 裹1 A组和B组基本情况 S．Young，MD，PhD主 编、李艳等主译的分析前因素对临床检验结果影响》中也未 提及n]。因此我们用无任何添加剂的真空采血管(A组)和分 离胶促凝剂真空采血管(B组)采集51名门诊患者空腹静脉 血样，然后对两种试管HBV—DNA结果进行统计分析，以探 讨分离胶促凝管对HBV—DNA实时荧光定量PCR的检测是 襄2 A组和B组配对t检验 否有影响和在核酸检测中应用价值。 系数r平均值—≮意产。气}‘咀(双侧) 1材料和方法 1．1材料无任何添加剂的真空采血管和分离胶真空采血 芏i：；；：监!：竺!：竺竺：!：竺!：!竺!!：竺!：竺 管由福州长庚医疗器械有限公司生产；HBV—DNA荧光定量 裹3 8份样本不同处理HBV—DNA的检测结果(对数表示) PCR检测试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司生产(批 号2009007，有效；基因扩增仪为美国町OPTI． CON I型实时荧光定量PCR仪(仪器产品编号OP001261)； 湘仪H一1650型高速离心机；使用的吸头、1．5ml离心管等耗 材均为一次性无菌高压物品并经本实验室试剂质检合格。 1．2方法 1．2．1采集本院门诊需做HBV—DNA项目检测的患者静脉 血51人份，同一患者分别用无任何添加荆真空采血管(A组) 和分离胶促凝真空采血管(B组)采血各2ml，分离两组血清。 1．2．2将以上两组血清按HBV—DNA荧光定量PCR检测试 剂盒说明进行提取模板DNA，空白对照、阴性质控品、临界阳 性和强阳性质控品同时也检测。扩增程序：93℃2min；93℃ 45sec55℃60sec-*10个循环；93℃30sec--，55℃45sec--读板一 30个循环；扩增结束。两组样本的检测在同一批次上运行， 标准曲线的斜率及线性相关系数r值达本实验室要求，临界 阳性和强阳性质控品均在控，两组所测样本阈值循环数 (threshold cycle)CT值(cT值大于或等于30的按30计算)和 病毒载量(用Iaglox对数表示，试剂盒线性范围2—8，低于线 性范围的结果以2计算，高于线性范围的结果以8计算)用 图1 8份样本不同处理的扩增数据图形 SPSS 13．0统计软件进行配对t检验，分析结果如表1和表2 表1所示AB组两组CT值和病毒载量的基本情况；表2 所示。 所示AB两组cT值和病毒载量的相关性显著(相关系数r分 1．2．3 分离胶干扰实验：另外选取A组HBV—DNA浓度 (m／m1)O．7次方的样本共8份，将1．5mI的离心管分为两 组，其中一组离心管人为地加入少许分离胶，另一组离心管 0．05)；表3和图1所示在8份血清样本中加入分离胶与不加 中不加分离胶，8份样本分别吸取100ul血清加到两组离心管 分离胶处理后，其中两份阴性样本均无扩增曲线，其余6份 万方数据 阳性血清样本检测值最大差值为0．19，最