细胞学实验复习大纲..docVIP

常用实验动物的了解和解剖器械的使用 一、常用实验动物 细胞生物学实验中，除应用培养细胞外，最常用的动物是蟾蜍和小白鼠，下面对其特点及基本处置做一简单的介绍。 蟾蜍 蟾蜍是两栖类动物，由于其取材方便，常用于各种实验。其细胞较哺乳类动物的细胞大得多，因此常用于观察细胞形态的实验。 1．雌雄鉴别 通常雄性蟾蜍较雌性的为小，且在其前肢的l～3趾基部有被称为婚垫的黑疣。 2．捉拿及处死方法 常用捣髓法处死蟾蜍，即用解剖针捣毁其脑组织和脊髓。具体方法是，左手握住蟾蜍的身体和四肢，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直插入此凹陷约l～2mm，随即将针尖转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其四肢松软，呼吸消失为止。 小白鼠 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。 1．捉拿方法： 将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。 2．处死方法： 处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速死亡。常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器，二氧化碳吸入法则将小鼠放入盛有二氧化碳的容器内即可。颈椎脱位法的具体方法是：左手拇指和食指按住小白鼠的头部，右手捉住其尾巴迅速向后猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。 3．给药方法： 小自鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，进针1～2mm后，再以45°角刺穿腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／10克体重。 二、显微镜的使用方法 显微镜在使用前，应先检查一下它的各个部件是否完整和正常，并进行必要的清洁工作，然后将显微镜放置在自己左肩前方的实验台上，离桌子边缘3—6cm为宜，以便观察。 (一)低倍镜的使用方法 1．对光 2．放置玻片标本 3．调节焦距 (二)高倍镜的使用方法 1.一定要先在低倍镜下找到要观察的标本物像后，再把需要放大的部分移至视野正中，并把物像调节到最清晰的程度。 2．转动物镜转换器 (三)油镜的使用方法 1.在高倍镜下找到所要观察的标本移至视野中心。 2.把集光器上升到最高位置，光阑开到最大。 3.移开高倍镜，在要观察的部位的盖玻片上滴加一滴香柏油作为介质。 4．稍稍上升镜筒或下降载物台，使油镜对准通光孔，慢慢转动粗调螺旋，使油镜与油滴接触，再小心地使它贴近盖玻片表面。 5．用眼观察目镜，微微上升或下降载物台，直到出现清晰的物像。 6．油镜使用完毕，先用拭镜纸蘸少许二甲苯将镜头上的大部分油去掉，再用干拭镜纸擦拭。擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周擦。 1.DNA的原位显示—Feulgen染色法 『目的要求』 1、掌握Feulgen反应的基本原理 2、掌握Feulgen反应操作全过程。 3、熟悉细胞化学技术 『实验用品』 光学显微镜、恒温水浴锅、染色缸、小烧杯、滴管、载玻片、Schiff试剂、1N的HCL溶液、3%的亚硫酸氢钠溶液，4.5%的醋酸、洋葱根尖 『实验原理』 DNA经弱酸（1N的HCL）水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛基，这些醛基在原位与Schiff试剂（无色品红亚硫酸溶液）反应，形成紫红色的化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生是因为反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。。 『实验内容和方法』 （一）Feulgen反应的一般步骤： 1、取一小段洋葱根尖于小烧杯中，用1N盐酸60℃水浴中水解8min。 2、去盐酸，用蒸馏水漂洗片刻。 3、Schiff液染色30min。 4、用新配制的亚硫酸氢钠溶液洗3次，每次约5min 5、用自来水洗5min。 6、滴一滴4.5%醋酸于载玻片，将根尖放于载玻片的醋酸中，加盖玻片，轻压。 7、镜检：细胞内DNA的部位呈紫红色。 8、绘图 2.细胞膜的通透性 目的要求： 观察细胞膜的通透性及各类物质进入细胞的速度 了解膜通透性的一般规律 实验原理 细胞膜是一种半透膜，对物质的通透具有选择性。将红细胞放在低渗溶液中，水分子会大量渗到细胞内，使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，这种现象称为溶血。将红细胞放入含