细胞工程复习学案一轮..docVIP

细胞工程学案 要求级别：Ⅰ 考题分布： (2006天津30(6)).(2006江苏35).(2006重庆31).(2006广东34).(2006全国Ⅰ,3).(2006北京1). (2006江苏生物7).2006广东生物6).(2005广东5). （2004江苏39）. (2004全国二5).(2004广东27).(2004上海8).(2003上海36).(2003江苏21) 一、.病毒为什么可以促使细胞融合 体细胞融合的关键是要找到一种能促使细胞融合的促融合剂。在动物细胞的最好促融合剂是仙台病毒。病毒有个特点，它能附着在宿住细胞表面，然后侵入。仙台病毒的优点在于它有若干附着位点，可以同时附着在两个不同的细胞表面。由于病毒体积很少，所以由一个病毒吸附的两个细胞靠得很近，并使细胞膜融合在一起，成为一个杂种细胞。开始时，细胞核可能并不融合，这样就构成了一个所谓的异核体。如果细胞核进一步与融合，就形成了一个真正的杂种细胞。不过这里所用的病毒先要经过灭活，它已不能侵入寄住，但并不丧失吸附的能力. 二、杂种细胞的选择和体细胞杂种的鉴定 （一）融合体的类型 1.未融合细胞： 再生植株与亲本相同 2.自体融合： 融合结果得到“同核体” 3.异体融合：融合结果得到“异核体”，由于融合形式不同,又分为几种： （1）谐和的细胞杂种：细胞完全融合，具有双亲全套遗传信息（包括胞核、胞质）。再生植株为异源双二倍体。这是最理想的融合。 （2）部分谐和的细胞杂种：细胞完全融合，但由于染色体排斥，细胞分裂过程中，部分染色体被排斥掉。 （甘薯+野生种杂种） （3）异胞质细胞杂种 ：细胞质来自于双亲，胞核来自于一个亲本，另一个亲本的胞核被排斥。 （4）嵌合细胞杂种 ：细胞质发生融合，而细胞核未融合，细胞核各自分裂，形成嵌合体，再生植株为嵌合体植株。 （二）杂种细胞的选择 融合处理后，有各种形式的细胞。异核融合细胞的分裂、分化，有的情况下会受抑制，因此，必要时，在培养早期选择杂种细胞，单独培养。 并非所有的融合都需要进行杂种细胞的选择，也可在植株再生后再鉴定杂种。 杂种细胞的选择方法： （1）根据形成细胞团的颜色、形状等来判断 （2）IOA处理与培养基相结合进行选择： A亲本用IOA（核失活-碘乙酰胺） A原生质体不能分裂；培养基使用不利于B亲本再生的培养基，这样B原生质体也不能再生。最后能再生的只能是A + B 体细胞杂种。 （三）体细胞杂种的鉴定 再生植株各种各样，如1所述。即使经过细胞选择，也还会有未融合体和同核体。为得到真正的体细胞杂种，必须进行鉴定。鉴定方法： 1.植物形态特征、特性鉴定 以融合两亲为对照，比较再生植株的形态特征、特性。如花的形状、颜色，叶片的形状和大小等 2．细胞学鉴定 染色体的数目、大小、形态等。特殊显微镜可辨别染色体颜色（马铃薯 + 西红柿）。 3.DNA水平鉴定：RAPD（随机扩增多态DNA） 分子杂交等 4.同功酶鉴定：同功酶 (isoenzyme)是指催化的化学反应相同，酶蛋白的分子结构、理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。 杂种细胞的选择和体细胞杂种的鉴定 三、关于B淋巴细胞与老鼠骨髓瘤细胞融合的问题 目前，动物细胞融合技术最重要的用途是制备单克隆抗体，但不能理解为用书中介绍的例子——B淋巴细胞与老鼠骨髓瘤细胞融合，已经能够生产人类的单克隆抗体。 由于单克隆抗体上仍带有鼠的抗原决定簇，患者仍然有可能产生针对于单克隆抗体的抗体，因此交叉反应产生免疫反应及过敏反应这一问题仍未得到解决。因此现在的目标是获得高药效低免疫性的人类单克隆抗体。 目前，人的单克隆抗体生产存在许多问题： ①致敏问题 人们努力寻求的抗体往往是针对有毒抗原的，无法直接用这样的抗原去刺激某人体，并试图获得相应的B淋巴细胞。 ②杂交瘤细胞不稳定 目前世界上已建立一些人骨髓瘤细胞株，它们和人的淋巴细胞融合后也能产生抗体，然而未能获得像小鼠骨髓瘤系那样理想的株系。产生的杂交瘤细胞存在也不够稳定，抗体效价也不够理想。 ③抗体的生产问题 已建株的细胞在体外培养较困难，若能在体内培养则较容易，这对于动物可以，然而用人的腹腔液培养就不可能。 ④转化细胞不稳定 用病毒转化B淋巴细胞细胞也可建立细胞株系，但传代后只有小部分细胞分泌特异抗体，且细胞随传代递减，很难建立起长期稳定的细胞株。 人—鼠细胞杂交也可以，但随着细胞的分裂，人的染色体会大量丢失。 摘自《细胞工程》 [例1]（2003江苏高考题）要将胡萝卜韧皮部细胞培养成完整植株，需要（ ） A．具有完整细胞核的细胞 B．离体状态 C．导入外源基因 D．一定的营养物质和激素 [解析]