体外生产猪原核期胚胎初探.pdfVIP

中圄畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集 体外生产猪原核期胚胎的初探 肖红卫，郑新民，刘西梅，乔宪凤，李莉，张立苹，华文君，华再东，毕延震，周荆荣 (湖北省农科院畜牧兽医研究所，动物胚胎工程与分子育种湖北省重点实验室，武汉430064) 引言 在进行原核显微注射法生产转基因猪时，需要大量的原核期胚胎，在有效供胚不足的情 况下，体外生产胚胎成为解决问题的理想的手段。与其它动物相比，猪体外生产过程中卵母 细胞核质同步成熟度不足、多精受精以及胚胎发育能力较低的问题一直没有得到有效解决。 为进一步提高猪卵母细胞的成熟质量，降低多精入卵的发生并提高猪胚胎的体外发育能力， 本试验研究了体外培养体系对猪卵母细胞体外核质同步成熟、体内受精对原核期胚胎获得的 影响。通过对IVM、IVF过程的研究，以期有效提高猪卵母细胞在IVM中的核质同步发育 程度、降低多精入卵率，并提高猪胚胎的体外发育能力，为原核显微注射法生产转基因猪研 究提供大量廉价实验材料。 材料和方法 猪卵巢，卵母细胞的培养器皿、FBS、DPBS—PVA冲卵液，DPBS液，成熟液。 卵母细胞的体外成熟：取卵巢，吸3-6mm卵泡中卵泡液。在体视显微镜下，挑选质量 好的卵丘细胞．卵母细胞复合体，转入成熟液中在培养箱100％湿度、5％C02、39℃培养。 卵母细胞的体内受精：在母猪发情之日手术移植所培养的卵母细胞，手术结束后即人工 授精，术后1416h手术冲胚。 结果 结果证明手术时对母猪的麻醉过程中生殖器官的蠕动减缓以及手术操作对卵母细胞受 精能力没有影响。自然排出的卵子与体外成熟—体内移植的卵子的受精能力相比较，体外成 熟培养的卵母细胞体内受精的能力相比体内胚的受精能力稍差，这个结果与体外成熟率有很 大的关联，与前期体外成熟培养有关。培养24h卵母细胞不能完成受精，不具有受精能力， 而且输卵管液不能支持卵母细胞的成熟。在体外培养44h卵母细胞核已成熟、胞质也成熟， 具有受精能力。输卵管液能够支持受精胚的进一步发育。 讨论 手术移植体外培养的卵母细胞后立即进行人工授精操作，从而使精子能够在卵子老化前 达到壶腹部与卵子结合。采用的是没有去除卵丘细胞，可以诱导精子获能，促进顶体反应的 发生。利用体外成熟培养卵母细胞并移植剑母猪体内进行体内受精，获得了大量同期的原核 期胚胎，为大量生产猪原核期胚胎奠定基础，为转基因猪研究提供了大量廉价实验材料。 参考文献(略) 2