转人溶菌酶猪环境安全评价.pdfVIP

·扬州· 第十六次全国动物遗传育种学术讨论会论文集 ·211· 转人溶茵酶猪环境安全评价 赵杰，许建香，王建武，张磊，李宁 (中国农业大学，农学与生物技术国家重点实验室，北京 100193) 引育 随着转基因技术的迅速发展，转基因动物目前广泛地应用于生物学基础研究、医学、农业、生物工程领域，然而，转 基因动物的安全问题也越来越备受关注，其中很重要的一方面就是转基因动物的环境安全问题。溶菌酶是一种广谱的 杀菌蛋白，在动物转基因育种中可以提高动物的抗菌能力，那么人溶菌酶基因是否会发生水平基因漂移及人溶菌酶基 因的插入是否会影响内源基因的表达或者产生新的蛋白对其猪自身体内代谢产生影响从而使得排泄物对周围环境造 成影响?本研究通过3个方面对转人溶菌酶猪周围环境进行检测，包括人溶菌酶基因与周围环境微生物发生基因漂移 可能性，对人溶菌酶猪肠道微生物及周围土壤微生物群落结构的影响检测，排泄物和周围土壤N、P含量是否超标，来 整体看转基因动物对环境造成的影响。这一研究将弥补在转基因动物环境安全评价领域的空白。 材料与方法 选取实验室猪场的4头转人溶菌酶基因阳性猪(2头F0代’2头F1代)，和4头普通猪(其中2头与F0代相同年龄， 2头与F1代相同年龄)，分春夏秋冬四个季度对转人溶菌酶猪及其对照猪的粪便进行采样，并对转溶菌酶猪舍周为土壤 分0m，15m。30m，45m。60m5个采样点采样，提取微生物基因组．用PCK-DGGE和16SrDNA测序方法进行微生物 群落结构分析和PCR。Q—PcR方法进行基因漂移分析，并对粪便和土壤样品进行N、P理化成分分析。 结果 对4个季节的土壤和粪便样品进行了微生物基因组的提取，采用普通PCR，高灵敏性Q—PcR的检测方法，并没 有检测到微生物中存在人溶菌酶基因，说明转人溶菌酶的基因并无发生基因漂移，肠道微生物群落结构分析发现，四个 季度的土壤，主要菌群均为Firmicutes，土壤的菌群结构在5个采样距离上几乎没有差异，主成分分析和聚类分析也显 示转人溶菌酶猪和普通猪的相似性值大于95％。只有在秋季稍低88％，不同距离的土壤多样性指数的季节性变化趋势 也相同，说明人溶菌酶基因的转入并无对环境中微生物群落结构造成影响。粪便和土壤的N、P含量统计分析发现，转 泄物不会对环境造成恶劣影响。 讨论 转基因动物的研究正逐渐走向经济领域。为经济社会的发展起到了极大的促进作用，然而转基因动物的安全性问 题一直是争论的焦点。到目前为止，转基因植物的环境安全评价已进展很多，然而对于转基因动物的安全评价才刚刚开 始，对转基因动物环境方面的安全评价几乎空白。此项研究旨在消除大家对转基因家畜环境安全方面的顾虑，推进转基 因动物向更广更宽的领域发展。 关键词：转人溶菌酶猪；环境；PCK-DGGE；基因漂移 致谢：本研究受转基因猪、牛、羊环境安全评价技术课题的资助，感谢李宁实验室所用同学给予的帮助。