原位杂交观察生物材料对骨桥蛋白mRNA基因表达影响.pdfVIP

：医缱袈蛮醛喜物材抖对嚣挢蛋白!uRNA基固越的影响 0。丽“王丽珍’张伟囡+ 薛淼’赵寿尢“李吕本6 +上海第二医科人学Ⅳ，属九腕、上海生物材料研究测试中，C (上海市斜士路716号200023) 6复旦人学遗(1iJI究所、遗传生物学【!J家重点实验室 (上海市邮郸踏22{．I号200433) 摘要：目的玑察生物材料对成骨自IIH乜骨矫蛋白mRNA基幽表达的影响。方法将生物材料浸提液 与原代成骨--51Ii甚同培井，用骨娇蛋白探针与细胞_i』c行原位杂交。结果无细胞球性的，址示该丛囚表 哒的蓝色顿粒，肯毒性的则不表达。结论原位杂交法规察生物割料对成骨到胞骨柝蛋白坫心表达的托 响可用于对置垣厶型魁加世生物扭在性硼f究． 一、引言 对丁二医用生物材料的生物相容性IiJf宄不能局限于整体和细胞水平，还应深入纠分子 水平去研究。九十年代仞，学者们提出：竹确定了对生物材料进行分子生物相容-吐研究的 设想。{l】若生物村荆对生物把体或细胞有毒性作川的话，在分子水平就可能会更灵敏地 反应出来。 的胶原嗣l非胶原蛋白的mRNA基因表达与未经材料作川的止常细胞相比，是否有差异， 可以提示该材料对!1111的繁殖和分化功能在分子水平上的影响，从而评价该生物材料的 分子生物相容性。12】 本研究是采Hj原位杂交试验来观察医}H生物利料对体外培养的原代成骨细胞骨桥蛋 白(osteopontin)的mRNA基因袭达的影响。 二、材料与方法 (一)生物材料浸提液的制备 1．医用高分子材料试样整形植入硅橡胶(p)和进口印模硅橡胶(Y)制成直径o．5cm 厚0．Jcm的圆片．每片烈面表面积o．56cm2。 2．陌|性对_；{{{：O．64％苯酚．阴性对照：生理盐水． (二)原代sD火鼠JB；lfi头盖骨细胞体外培养 sD孕鼠在无菌下取出2l天的胚鼠，分离出头盖骨，去净软组织和骨腆，剪碎骨 板，辟j 95％湿润空气、5％C02环境中开放培养24h后换液。3犬后细胞传代，培养在24孔 板中。 (三)浸提液作用培养 在原代培养的SD鼠头盖骨细胞的第2代，细胞蚶i壁屙加入材料P,ItY浸提液及 i{[5、附注对照．使终浓度稀释至原浸提液的10％，在上述条件下继续培养5天。 一80一 (四)细胞原位杂交 梯度脱水，经二甲苯作用后，再』lJ10％．70％乙醇梯度水化。川01％肖登门酶}}lj 化，1％甲醛后『划定。细胞加入杂交液刷地l商辛标i0的目忻蛋rI探仆，37c—c杂交l8h口 用甲酰胺等配制的液体和SSC加SDS树：皮清洗。加入抗地高辛抗体的稀秆液． 再jI[|抗地高辛抗体(1：2000)室温下fi-,qJ 后，树脂封片，显微镜下观察。以上原位杂交试验刖无RNase水配制试刑。 三、结果与讨论 5天后，刚地高辛标记的骨桥蛋白探针进行细胞原化杂交，显微镜r见：在细胞质中显 对照苯酚作用成骨细胞，经同样探针原位杂交，显微镜F只见红染的细胞坎，不见监黑 色颗粒。可能是由于整形植入硅橡胶是高温尉化成W拍々，不舍或十艇少禽低挥发『I：订毒物 质，而口腔印模硅橡胶是室温吲化成型．其组分L}J含宵牧多的低挥发性订_【i}物质所投。 模硅豫胶有重度毒性(3级)。本实验中的细胞原位杂交结粜也与圳胞毒陛试验结粜棚符。 四、结论 无细胞毒y土的整形植入硅橡胶不影响成骨细胞阿桥蛋白的mRNA丛D、l表逸。有细胞 毒性的口腔印模硅橡胶则抑制骨桥蛋白的mRNA孳因住成甘细胞中的表达。细胞顾位杂 交法可用于对医朋生物材料，尤其是骨植入材料的分子生物棚容洼{i)I=究。 参考文献： JDent．Res．74：1 [1】LChou：Molecularbiocompat．b㈨y