猪源衣原体HB1043株分子鉴定及进化分析.pdfVIP

410 2011年学术年会 o T030051 猪源衣原体HBl043株分子鉴定及进化分析 周丹娜1 闫少侠2刘泽文1袁芳艳1杨克礼1段正赢1田永祥 (1．湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，湖北武汉430064；2．华中农业大学动物科技一动物医学院，湖北武汉430070) 引言／目的 衣原体为严格真核细胞内寄生菌，可引发动物和人的多种疾病。20世纪出版的伯杰氏细菌学鉴定手 册将衣原体归为立克次体和衣原体目，该目的衣原体原来只有1个衣原体科1个衣原体属。随着分子生物 学的发展，衣原体分类又引入了分子遗传学方法。1999年国际分类委员会批准了Everett等提出的以16S 和23SrRNA基因序列为基础的衣原体新分类体系，衣原体目共有4个科，其中衣原体科分为衣原体属和 嗜性衣原体属。本研究根据衣原体新的分类体系，通过分析比较16S／23S／16．23SrRNA基因序列，对本 研究室分离的猪源HBl043株衣原体菌株进行分子遗传学鉴定，进一步证明该株衣原体确切的分类地位。 材料方法 根据GenBank公布的衣原体16S／23S／16．23SrRNA基因序列比对结果，针对3个基因序列的保守区设 扩增其16S／23S116．23S 及序列分析(BLASTn，MEGA5．0)。 试验结果 rRNA、23SrRNA和16．23SrRNA基因序列。测序结果显示HBl043 分别扩增得至SJHBl043株的16S 6S 6-23S 株1 rRNA(JN426966)全序列1rRNA(JN426968)全序歹lJ2942bp：1 546bp：23S rRNA和23SrRNA序列均与鹦鹉热嗜性衣原体和流产嗜性 序YfJ223bp。BLASTn结果显示HBl043株16S 衣原体有99％同源性；16—23SrRNA序列与鹦鹉热嗜性衣原体同源性为99％，与流产嗜性衣原体的同源 rRNA、23SrRNA和16—23SrRNA基因序列与已报道的相 性仅为97％。随后，将HBl043株衣原体的16S 对应的20余种衣原体序列分别利用MEGA5．0(最大似然法)软件做进化分析，得到了正确的进化拓扑 结构图，显示猪源HBl043株衣原体属于嗜性衣原体属，与鹦鹉热嗜性衣原体和流产嗜性衣原体亲缘关 系较近，共用一个节点，但不与鹦鹉热鹦鹉热嗜性衣原体和流产嗜性衣原体共枝。 讨论 ． 核糖体RNA因其在进化过程中的保守性，将其作为分子分类的依据，己被众多学者所接受而广泛 使用。本研究室分离的HBl043株病原，在临床症状、鸡胚致死实验等传统检测方法中均证实为衣原体， 16SrRNA、23S rRNA和16．23SrRNA的比对分析也证实了此病原为衣原体，且属于嗜性衣原体属，与 鹦鹉热嗜性衣原体和流产嗜性衣原体有着较近的亲缘关系。此种分类鉴定法较传统分类方法而言更为快 速准确，能为物种的真实分类情况提供更详细的重要佐证。同时，进化分析结果显示，虽然HBl043株 与鹦鹉热嗜性衣原体和流产嗜性衣原体共一个节点，但并不共枝，因此，有关HBl043株的分类情况还 rRNA和23SrRNA的序列而言，16—23SrRNA这 应做进一步的研究。此外，研究显示，相比衣原体16S 段序列种间特异性更强，针对此段高变区设计特异性的引物，能开发出衣原体种间鉴别PCR诊断方法。