用人癌细胞株筛选23种光敏剂.pdfVIP

中国癌症研究进展。 用人癌细胞株筛选23种光敏剂 何立明都琳琳蔡心涵 应用四氮唑蓝(M兀’)试验方法对药物进行筛检已有10余年历史[1J。其原理是活细胞内 线粒体脱氧酶能将四氮唑化合物裂解，这种裂解作用可通过比色反应由黄色而显示出来，能较 客观地反映细胞存活数。我们应用MTT方法观察了23种已分离结构的血卟啉类单体光敏 动力杀伤作用进行比较。 祷将s方法 1．光敏荆 23种单体结构光敏剂均为血卟啉类衍生物，由第二军医大学药物化学研究所 提供，各种光敏剂样品的化学结构均经波谱确证，其纯度≥95。 免疫检测仪由南京华东电子管厂生产。MJZ-!型脉冲铜蒸汽泵浦染料激光机由浙江大学机电 设备厂生产。LPE．1B型激光功率／能量计由中国科学院物理研究所生产。 3．肿瘤细胞株人大肠癌细胞株SWlll6引自上海细胞生物学研究所，红白血病细胞株 K562由德国基尔大学医学院提供。 4．实验分组两株肿瘤细胞各分12个组：照光治疗组设9个药物浓度组，另3个组为对 照组。照光组的药物浓度设置以在预试验中基本确定的有效浓度为中心(中间浓度)，分别向 高低两侧备设4个浓度，浓度间隔相差为50％～75％。以处前10位IC∞的光敏剂为例，该9 个浓度分别为0．25 tLg／ml、1．25“g／ml、2．0119／ml、2．5 vg／ml、0．5#,g／ml、0．75旭／rnl、1．0 弘g／ml、3．75tLg／ml、5．0tzg／ml。对照组1．25pg／ml。3个对照组中，2个为不照光组，其中1 组不加任何药物(细胞对照组)，1组加中间浓度的药物(药物对照组)；另1组为不加药物照光 组(照光对照组)。 量培养板中，待细胞长至铺满孔底。K562细胞悬浮生长，吹散均匀接种于培养板中，离心 000 1 r／mln．10rain，使细胞贴在培养板上，弃液体，换成无小牛血清的培养液。对加药组分别 加人含有不同浓度光敏剂培养液，避光作用4h弃液体。对各照光组用自制的散光器以同一 光斑的激光均匀照射培养板中的细胞，光斑直径96孔培养板的长径，每孔细胞照光的能量 密度4 J／cm2来调整照光时间。以 J／cra2。由于实验时激光输出功率可能不稳定，均以能量4 使每次实验过程中，每孔内细胞的照射激光能量相同。照毕，Hank液洗2次，再加入含有小牛 作者单位：310009杭州，浙扛医科大学肿瘤研究所 用人癌细胞株筛选23种光敏撼 337 血清的培养液，继续置培养箱24h，加MTT磷酸缓冲液、异丙醇终止反应，使MTT代谢成蓝 紫色，由酶联仪比色定量计算出每一孔内的细胞生存率[吸光度(A)值]和50％肿瘤细胞抑制 率(I岛)。 “ 一 [c,jo=盥鼍舷胖×100％对照组A值 连续进行3次实验，结果用；±s表示，用SNK作统计学处理。 结 果 1．细胞生存率药物对照组和照光对照组细胞生存率均低于细胞对照组，但差异无显著 性(P0．05)，说明单纯照光和各光敏剂本身对肿瘤细胞仅有轻度抑制生长作用。而各对照 组与达到50％肿瘤细胞抑制率浓度的治疗组中的细胞生存率比较，PO．05。随着药物浓度 的增加。照光后各光敏剂对两株人癌细胞的杀伤作用明显增强，并随着光敏剂浓度的增高光动 力杀伤作用亦增大(附表)。 附裹酶位于前埔位的光敏剂对SWUl6和IK．鲕2细胞杀伤作用的比较 有效浓度 抑瘤 塑堕竺!兰!兰竺：!!!! 光敏if6 细胞 率(％) (t-g／m1) 细胞对照 药