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用高密度徽阵列比较鼻咽癌、肺癌与正常鼻咽组织基因表达谱 353 用高密度微阵列比较鼻咽癌、肺癌 与正常鼻咽组织基因表达谱 何志巍许亮国任彩萍甘润良谢鸯姚开泰 多因素多阶段肿瘤的发生过程中常有多个瘤基因或抑瘤基因的参与，如胃癌的p53、 突变参与肺癌的发生L1 o；而鼻咽癌与p53、c”Hn 是否还存在其他一些相关的、新的基因在鼻咽癌中起作用，又如何在大范围内同时观察这些基 因的表达变化呢?我们采用目前国际必威体育精装版的高密度函NA微阵列技术，同时检测鼻咽癌、肺癌 和成人正常鼻咽组织5184个基因或EST的表达差异，旨在寻找癌组织相对高表达而正常组 织低表达及正常组织高表达而癌组织低表达的基因，进一步阐明鼻咽癌的发生机制。 材料与方法 术患者，组织均为即刻液氮冻存。 I 5 物，PCR扩增检测有无gDNA污染。取RNAIlg于2％琼脂糖凝胶电泳，紫外仪检测摄像。 m0ligodT(1腭／m)，于70℃变性2mhl即刻置冰上，再加入6出5×链合成缓冲液、1出DTT 0．1mol见(BRL胜T如)、1．5鼻ddNTPs(dATP、dGTP、drrP均为20mnol／L)、1．5皿 SuperSeriptHRT(200 000 G50过柱纯化探针，其放射活性计数在5 Ⅱlin。用Sephdex eprn以上。 4．杂交、洗膜及放射自显影于5瑚杂交液中加入5fllPoly h。先用 h后，加入纯化探针200皿，42℃杂交12 DNA(1腭／g)aE与GF200微阵列预杂交2 nll 该液洗一次．每次20 一70℃曝光24h。 本课题受国家自然科学基金重点项目和美国中华医学会基金项目资助(96—655) 作者单位：410078长沙，湖南医科大学肿瘤研究所卫生郁癌变原理重点实验室 中国癌盎研究进展0 阵进行密度分析，得到密度分布和杂交点阵图。 结 果 1．组织总RNA提取各组织总RNA，经DNaseI消化后，PCR检测除阳性对照有扩增带 2．组织5 阵列杂交后。由软件处理。 3．各组织基因表迭谱的差异由Pathway软件包分析各点阵杂交密度。结果表明二者表 达谱相似，均存在大量低表达的EST，但在各密度值范围内的基因或EST数不同，密度值在 鼻咽癌低表达，3个EST在鼻咽癌高表达但正常鼻咽低表达；鼻咽瘸与肺癌也存在不少差异 表达基因，如附表。结果说明正常鼻咽与鼻咽癌组织可能存在多个差异表达的新基因而在该 瘤的发生中起作用。 附表a舢徽阵列裹达密度值在200以上的10个已知基因 讨 论 DNA微阵列或芯片(Chip)是在尼龙膜或硅片表面通过光导化学合成能代表不同基因的 互补序列结合，由计算机对放射自显影或激光共焦显微镜扫描荧光密度进行分析，获得杂交信 号的强度及分布模式，以反映目的材料中有关基因的表达情况。是一种高产出的、目前研究基 因表达的最佳方法【3，4．5J。它较传统的Northern 敏感地定量(5拷贝／细胞)、定性检测基因表达水平，且可同时研究同一组织或不同组织中成 用高密度檄阵列比较鼻咽癌、肺癌与正常鼻咽组织基因表达谱 355