柔性纳米脂质体作为环孢素经皮渗透载体的体外的研究.pdfVIP

柔性纳米脂质体作为环孢素经皮渗透载体的体外研究、 平其能郭健新孙国庆焦春红(中国药科大学药剂教研室210009) 作者曾研究了一种含有磷脂和表面活性剂分子胆酸钠的柔性纳米脂质体，并证明了其在外力作用下具 有特定的变彤性，为了深入探讨该种载体携药穿透皮肤能力以及载体各组分的作用，选择非极性环状11肽 一环孢素作为模型药物，研究仅由磷脂组成的普通纳米脂质体和含有表面活性剂胆酸钠的柔性纳米脂质体 对离体小鼠皮肤的渗透作用，并与胆酸钠增溶的环孢素溶液的透皮作用进行了比较。 l实验部分 1．1 仪器与试剂 心沉淀机(上海手术器械厂)；高效液相色谱仪(shinmdm 投入式多功能磁力搅拌器(安徽省天长恒运电器厂)；渗透扩散装置(自制，渗透面积S=2．ocm2，接收池容积 小鼠(中国药科大学动物中心)。 1．2脂质体混悬液的制备 5mg，加入30mL氯仿一甲 定量称取磷脂酰胆碱(由豆磷脂精制纯化)650rag、胆酸钠100mg和环孢素37 醇(1：1)复合溶剂，于37℃恒温水浴中旋转蒸发去除有机溶剂，使磷脂等成膜材料在烧瓶壁形成均匀类脂薄 按相同比例制备处方中不含胆酸钠的普通脂质体混悬液。 1．3探针式超声法制备纳米脂质体 胶体溶液，经015／nn微}L滤膜过滤除去探头释放的钛颗粒等杂质。 1．4 胆酸钠胶团溶液的制备 置72h直至达到平衡：过滤除去不溶物，取续滤液待用。 完全溶解3．75％的环孢素A需要40％的胆酸钠溶液，得到相当粘稠的溶液。 国家自然科学基金资助项目。项目号3卯7088 1．5 ㈣色谱条件 柱压，印叫cm2；检测波长，UV210rma；迸样体积为20出。 9％NaCl溶液以及20％和50％乙醇溶液中的平衡溶解 接收介质的选择：测定在37qC条件下CyA在0 度。 试验确定合适的接收介质。 1．6 药物含量测定 精密移取10止的纳米脂质体或胶团溶液于10mL的量瓶中，加人无水乙醇，振摇，定容并测定含量。 1．7 皮肤中药物测定 取经皮渗透研究后的皮肤(面积为2．ocm2)，先用50％乙醇擦拭3次，然后用水冲洗3次。用剪子将皮 肤剪碎后，放于玻璃匀浆器中，加入蒸馏水2mL将皮肤研磨成匀浆，转移至10mL离心管中，加入复合溶剂乙 水浴中通氮气流挥干，管壁用lmL乙醚洗涤，水裕中重新挥干，用100皿流动相溶解残渣，同时加入脚L正 己烷，振荡、离心后精密吸取20tzL，注入高效液干日色谱仪，在上述确定的色谱条件下进行色谱测定。 为了验证清洗皮肤方法的可靠性，在皮肤表面涂布20^儿柔性纳米脂质体溶液(含药量为3．297r叫-也)， 然后依上述方法立即清洗并测定皮肤中药物的含量作为对照。 1．8 经皮渗透试验方法 取体重18～229小鼠，处死，用剪刀剪毛，剥取腹部皮肤，不进行任何处理直接用于渗透实验。将皮肤平 铺在接收池上，固定。通过取样管在接收室中注入接收介质17mL为接收液，使液面恰与皮肤内层接触，用 微量注射器移取20¨L纳米脂质体溶液(或胶团溶液)涂布于皮肤表面，让其自然干燥，保持恒速搅拌和37℃ 收室中的气泡，取续滤液注入液相色谱仪，测定峰面积，代人标准曲线求出相应的药物浓度ci，计算累积透 过量。 2实验结果 2．1 I-IPLC测定c心方法可行性及线性范围 皮肤和24h空白接收液的色谱图在药物出峰位置未见其它杂质峰，说明皮肤成分和空白接收液成分并 不干扰药物的含量测定。在接收液中环拖素蜂面积A与药物浓度C在0．1～4t-ggmL浓度范围内线性良好， 5，，=o，9998)。最低检测限为10ng。 2．2接收介质的选定 37C条件下CyA在0 0．02)t,g／mL、(60．61±3．96)f卅mL和(167．24±7．37j蚓InL。 CyA在水中几乎不溶，选择水性接收液由于药物溶解度问题只能采用同位素记数法。但CyA易溶于有 机溶剂，溶解度随有机溶剂浓度增加而增加。国内外文献多选用甲醇或乙醇作接收介质，醇的浓度在20％ 至50％的范围内。为了确定乙醇溶液的合适浓度，使之既有利于药物的检测和漏槽条件的满足，又能减少 对皮肤生理结构的破坏。选择20％乙醇作为接收介质时，CyA乙醇液挥干后经离体无毛小鼠皮肤的渗透