人类免疫缺陷病毒感染者病毒载量的研究脑JJ研.pdfVIP

8．8l。 H ． HzV-~ 人类免疫缺陷病毒感染者病毒载量研究 脑J研J 上海医科大学 附属华 山医院 莫 凌 综述 潘孝彰 康来仪 审校 摘要 人类免疫姨 陷病毒 (HIV)戴量是指 HIV感染者体内潜伏 的和具有复制活性 的病 毒数 ．它包括血浆中的循环 HIV—RNA和整合到细胞 内的HIV—DNA 即前病毒。近年来随着 检测技术的发展 ，凡们发现早期感染者的组织 中已存在大量病毒和病毒产物 ，田此可用病毒 载量来评估无症状感染者 的免疫状态和病毒 的复制恃况 。近年来病毒载量的测定 已被 广泛地 用于多项临床研究及观察中，现就 HIV感染者病毒载量研究的若干进展作一简要埔述 。 一 、 HIV—RNA戴量的检测方法 而减少了温度变化带来的实验误差 。早期 的 从 1996年 以来 ．HIV—RNA检测的方法 这 3种方法 的检测低限为每毫升 200～500 主要有 3种 。反转录 DNA 聚合酶链反应 的 HIV—RNA拷贝数，而检测高限为每毫升 10 AmpllcorHIV监测系统最先在美国获准进 ～10’拷贝数。三者的检测结果很一致 。最近 行商业 fl：应用。这一方法通过胍基硫氰酸盐 这 3种方法都有 了更新 ，其敏感度更高 。检 提取、异丙基 乙醇沉淀获取病毒RNA，所获 测的下限闫值达每毫升 20~50拷贝数。必威体育精装版 的RNA被反转录为一条互补的cDNA，经 的NAsBA分析法通过改变内部标定标准 ， PCR扩增，扩增产物通过生物素一抗生物素 而bDNA分析法通过加强RNA捕获技术达 蛋 白检测定量 。第 2种商业化分析方法是 到提高灵敏度。目前 ．采用定量原位杂交技 HIV—RNA支链DNA (bDNA)分析法。其 术与计算机分析技术相结合的方法．可计算 原理是用检测板底部的捕获探针通过靶探针 多种组织标本中的HIV一1载量，又可直接看 捕捉病毒RNA，靶探针除与RNA结合外， 到细胞和组 织的结构。该技术正在发展之 另与bDNA结合 ，后者将标记探针连接上 ，三 中 。 者连成一体 ，标记探针在 dioxetne存在时会 二 、HIV—RNA检测的应用 发光，然后，可根据参考曲线的化学荧光信 HⅣ 感染者通常在感染后 3～8周进入 号进行定量 (如下图所示)。与第 1种方法最 急性期，急性感染期感染者体内的病毒水平 大的不同在于该法不是靶的放大 ，丽是信号 很高而抗体尚无法检测到。大量的病毒颗粒 的放大。第 3种分析方法是核酸序列基础扩 播敞到全身各组织器官中，尤以淋巴结、睥 增分析法 (NASBA)。它采用特殊的硅石．通 脏、扁桃体和腺样增殖体为多。随着抗体产 过 日旺基硫氰酸盐提取 RNA．靶 RNA在 3种 量的增加．抗体检测试验转阳，机体中和病 恒温酶的作用被直接扩增 ，最后被扩增的信 毒的能力增强 ，血浆中病毒量开始减少。从 号对照标准读取读数 该法与第 1种方法相 HIV感染到血清抗原阳转之前的这一时期 比，其特点在于硅石有特异性 ，能获取特异 称为窗期．随后的无症状期可持续数年。这 的核酸 同时固有了特殊的酶，该酶的使用 时病毒继续复制并破坏CD4 细胞．而机体 可使扩增过程不必经过升温、降温过程 ，从 也不断产生新的CD4细胞和