一种改进的玉米SSR标记的PAGE快速银染检测新方法.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2004,12 (5): 606~607 ·研究简报· 一种改进的玉米SSR 标记的PAGE/ 快速银染检测新方法* 王凤格 赵久然** 郭景伦 佘花娣 刘龙洲 （北京市农林科学院玉米研究中心，北京 100089 ） ： ； 关键词 玉米 SSR；快速银染法 An Improved PAGE/ Rapid Silver Staining Method Used in Maize SSR Markers WANG Feng-Ge ZHAO Jiu-Ran** GUO Jing-Lun SHE Hua-Di LIU Long-Zhou （Maize Research Center, Beijing Academy of Agricultural and Forestry Sciences, Beij ing 100089,China ） maize; SSR; rapid silver staining 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术由于其检测灵敏度和分辨率 法；方法4 为本研究改进的快速银染法：染色液（10%乙醇、 高的特点，特别适合于像SSR 这样的小片段扩增产物的检 0.5%乙酸和0.2% AgNO3 ）染色5 min ；显影液（3% NaOH 和 测。银染法是其常用的显影方法之一，不同的银染法操作步 0.5%甲醛）显影。 骤及采用试剂有一定差异，主要集中在固定液的选择和洗脱 2 结果和分析 次数上。本研究在参考以往各种银染法的 础上，进一步简 化操作步骤，仅需染色和显影两步即可进行结果的判读，将 2.1 快速银染法的有效性 其应用于玉米SSR 标记的PAGE 银染检测，为SSR 技术在 本研究改进的两步快速银染法将固定和染色两步合二 玉米种质纯度及真伪快速鉴定上的应用提供技术方法。 为一，染色后不经洗脱而直接显影，显影较 ，一般不超过 2 min 即可获得清晰的带型，整个过程不超过 10 min。几种银 1 材料和方法 染法进行比较，按操作时间长短和成本高低顺序依次是方法 1.1 材料 1234 ，按操作步骤顺序依次是方法 1/2(七步)3 （四步） 植物材料为28 个来自不同育种单位的玉米 ( 4 （两步），按背景深浅顺序依次是方法 123/4 。因此改进 L.) 自交系（名单略），玉米SSR 引物由上海生工合成。 的快速银染法操作更加快速简便，成本降低，在实际应用上 1.2 实验方法 具有明显优势。染色背景随着显影时间延长会有一定程度的 [1]