5-生物化学实验指导书.doc

生 物 化 学 实 验 指 导 书 生物化学教研室 2011、2、1 目 录 实验须知 实验内容 实验一 蛋白质的两性电离和等电点的测定 实验二 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 实验三 血清总蛋白测定（双缩脲法、Folin—酚法） 实验四 PH与温度对酶活性的影响 实验五 激活剂和抑制剂对酶活性的影响 实验六 酶的特异性 实验七 琥珀酸脱氢酶活性的抑制 实验ALT的测定 实验十三 血红蛋白与核黄素的凝胶柱色谱分离 实验十四 肝组织核酸的提取、分离和鉴定 实验十五 血清尿素氮的测定 实验十六 血清胆红素测定 实验总糖的测定---蒽酮比色法实验：饥饿与饱食对肝糖元含量的影响实验：乳酸脱氢酶活力测定生物化学实验须知一、实验目的1．培养学生科学的思维方法作风，独立工作能力。2．学习基础生物化学实验方法，为今后的学习与研究准备更好的条件。3．培养学生爱护国家财物、爱护集体、团结互助的优良道德品质。4．培养学生的书面及口头表达能力。二、实验的总要求1．按教研室予先公布的实验进度表，了解各次实验的具体内容，并认真做好预习。弄清各步骤的意义，避免教条或机械式做实验。未预习者不得进实验室。2．进行实验不仅要求结果良好，而且要求敏捷高效。一切步骤都按正规操作法进行；样品与试剂勿过量取用；注意力集中，避免差错。3．实验中观察要仔细，记录要详尽、及时与客观无论实验成功与失败，都应直接记在实验报告本中，不得于实验后追记对于失败的实验，要分析其原因。4．实验室是集体学习与工作的场所，实验时应保持肃静，不得大声喧哗，以免影响他人的工作与思考。实验后应清洗过的仪器及清理自己的实验场所。对师长尊敬，对同学要团结友爱。三、实验报告实验报告的书写是培养学生书面表达能力和科学作风的重要手段之一，实验者应该重视。实验报告的内容包括下列各项：实验名称、实验日期、实验的、实验原理、实验步骤，实验记录、计算、讨论或小结。实验记录应包括随做随记的原始记录。书写实验报告要字迹工整，语句通顺。书写工整的实验报告，是尊师的重要表现之一。四、组织与分组1．每一实验室推选一名学生课代表，负责下列工作：①实验报告的收集与分发；②安排清扫值日名单；③反映同学学习情况及对教学工作的意见；④其它临时性的工作。2．一般每个学生单独进行实验。有的实验要两人一组，由相邻两学生组成固定小组。小组的成员指导教师的同意下，可作适当的调整。五、仪器1．每次实验前，实验者应根据本实验使用的仪器种类与数目，检查分发在实验桌上的各种仪器，如有缺损应于清洗前立即向准备室负责老师补换。实验中如有破损，则必须登记，按学院规定处理。实验后应将完整仪器洗涤清洁，点交管理人员。2．公用仪器（包贵重仪器，如光光计、电动离心机等）使用时间不宜过长，以免妨碍他人工作。设有使用登记薄的仪器，使用后必须登记，以示负责。对于不熟悉之仪器，应请教师指导切勿随意乱动。六、试剂1．每2~人合用一份试剂在一般情况下，使用的试剂应该固定。2．取试剂瓶塞与量取用具（如吸管或滴管）不应分开，用后应立即放回原处，量取用具应按规定放置。瓶塞与量具一旦弄错，试剂即受损坏、污染，实验就可能失败。3．标准试剂不应用潮湿之吸管与之直接接触，取出后不得再放入原瓶。七、玻璃仪器的洗涤一般玻璃仪器用肥皂或去污粉以毛刷洗涤即足以满足要求，洗后应将肥皂或去污粉仔细冲掉，将水倾去后，器壁不挂水珠，视为合格。铬酸洗液仅用于毛刷不能洗净的仪器，切勿滥用普通玻璃仪器之洗涤。使用铬酸洗液时，仪器应干燥；过多的水份将使洗液迅速失效。用过之铬酸洗液须加以保存以反复使用，直至为绿色后方可舍弃；其舍弃法与浓硫酸液相同。用洗液浸洗过的玻璃仪器，应先用自来水冲洗，然后再用蒸馏水或去离子水清洗，清洗时，宜采用“少量多次”原则以节约蒸馏水，同时清洗的效率也高。八、舍弃物的处理舍弃物必须依照其性质作适当处理。以免造成实验材料浪费，损坏水槽及下水管道，或污染实验环境。1．所有固体舍弃物（例如用过的滤纸、损坏的软木塞及橡皮物、玻璃渣、火柴梗等）。必须放入废物筒或篓中，切勿丢水槽中。2．废硫酸或洗液，应先倾入大量水中，再倒入水槽中，并以大量水冲走。3．实验完成后的沉淀或混合物，若含有可提取或收回的贵重物品者，不可随意舍弃，应放入教师指定的回收器中。 带电粒子在电场中移动的现象称为。血清蛋白质的等电点均低于pH7.4，因此，在pH比其等电点高的缓冲液中它们都电离成负离子，在电场中都会向正极移动。因各种血清蛋白质等电点不同，在同一pH下所带电荷数量不同，加上分子量的差别等因素，它们在电场中的运动速度就不同。蛋白质分子小而带电荷多的运动较快；分子大而带电荷少的运动较慢。所以可利用电泳将血清蛋白质按其在电场中运动的速度快慢分为白蛋白、α－球蛋白、α2－球蛋白、β－球蛋白及γ－球