实验报告---大孔树脂分离纯化杜仲绿原酸.docVIP

大孔树脂分离纯化杜仲绿原酸的研究 一、实验目的 1.1 熟练掌握如何对大孔树脂进行预处理。 1.2 了解大孔树脂对绿原酸的吸附效果。 二、原理 绿原酸(Chlorogenic acid)是由咖啡酸(Cafeic acid)与奎尼酸(Quinic acid)组成的缩酚酸，异名咖啡单宁酸，化学名：3一D-咖啡酰奎尼酸(3-0．Cafeoylquinic acid)，分子式：C16H18O9，分子量：354．30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物。绿原酸是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用I1 J。它是许多中药材的有效成分之一，又是某些成药的质量指标。绿原酸应用非常广泛，主要为医药、日用化工和食品等行业。 绿原酸在各类植物中的存在相当普遍，但含量较高的植物并不多见。近年的研究表明，杜仲叶绿原酸含量丰富，可达1％一5％ 。我国杜仲林种植广泛，每年可产杜仲叶几百万吨，这为提取绿原酸提供了充足的原料基础,因此,从杜仲叶中分离提取绿原酸具有重要的意义 大孔树脂具有选择性好、吸附量大、效率高、易洗脱、再生和成本低,特别适用于水溶性化合物的分离纯化等优点,在生物碱、皂甙、黄酮、多糖等的纯化中已有应用，并取得了显著的效果。 大孔树脂种类较多,极性不同,吸附性能各异。本实验以以绿原酸为吸附质,分别采用静、动态吸附和洗脱实验等方法考察了树脂对绿原酸的吸附性能,筛选出对绿原酸吸附、分离性能好的大孔树脂,并得出吸附洗脱的最佳工艺参数,为工业化分离提取绿原酸创造了条件。 三、试剂与仪器 3.1 材料与试剂： 绿原酸粗品；乙腈为色谱纯试剂，磷酸、甲醇、乙醇等试剂均为分析纯；NaOH固体，HCl溶液，聚酰胺树脂，大孔树脂，柠檬酸。 3.2 主要仪器： 高效液相色谱仪，分析天平，10ml、25ml、50ml、100ml容量瓶，滴定管，1ml、2ml、5ml的移液管。，DZF-6050型真空干燥箱，恒温水浴振荡器，磨口三角瓶，培养皿，恒流泵，玻璃吸附柱6. 0 ×60 cm，铁架台，紫外分光光度仪，比色皿；擦镜纸；注射器，烧杯，玻璃棒，洗耳球。漏斗，定性滤纸，标签纸。 四、实验步骤 4.1高效液相色谱所测的杜仲绿原酸粗品含量 准确称取绿原酸粗品1.153g置50 m L棕色容量瓶中,加60%甲醇适量,超声溶解并稀释至刻度,摇匀,准确移取0.5 m L置50m L棕色容量瓶中,用60%甲醇溶解并稀释至刻度,得绿原酸溶液备用。 4.2树脂筛选 4.2.1树脂的预处理 各种大孔树脂分别用去离子水溶胀、浮选24h后,在1 mol/L NaOH溶液中浸泡4h,用去离子水洗至中性; 然后在0. 5 mol/L HCl溶液中浸泡24 h, 用去离子水洗至中性; 再在70%的乙醇水溶液中浸泡24 h,不断搅拌,用去离子水洗至无白色浑浊现象,无乙醇味后,用去离子水浸泡待用。 将聚酰胺树脂用95%的乙醇溶液浸泡24 h用去离子水洗至无乙醇味后,再用4%的NaOH溶液浸泡24h,滤掉上层碱液，用去离子水洗至中性; 然后用4%的柠檬酸溶液浸泡24 h,再用去离子水洗至中性，用去离子水浸泡待用。 4.2.2 各种树脂静态吸附性能比较　 选用7种树脂(NKA-Ⅱ、NKA-9、FL-1、S-8、FL-3、B2、聚酰胺)测定静态吸附量、吸附率并进行筛选。准确称取经预处理好的树脂2g,装入150 mL的磨口三角瓶中,准确加入100 ml的杜仲提取液,盖紧瓶塞,在(25 ±0. 5) ℃的恒温水浴振荡器上振摇24 h。充分吸附后过滤,测定吸附液中绿原酸的浓度,按下式计算吸附量Q (mg/g)和吸附率E (% ) Q = (C0 – Ce ) ×V /W, E = (C0 – Ce ) / C0 式中, C0 为吸附液中绿原酸的初始浓度(mg/mL) ; Ce 为吸附后绿原酸的剩余浓度(mg/mL) ; V为吸附液体积(mL) ;W 为树脂重量( g) 。 4.2.3各种树脂静态脱附性能比较 　 7种树脂对绿原酸吸附完全后,一般可以使用甲醇、乙醇、丙酮等溶剂作为洗脱剂, 但丙酮易挥发、难回收,使工业化生产成本增加,所以通常选用甲醇作为洗脱剂。 取上述吸附饱和的树脂，精密加入90ml 50%的甲醇溶液，在25-05℃下于恒 温水浴振荡器上振荡24h，过滤，计算解吸率： 解吸率(％)=C1 V1【(Co 一Ce )×V】 x 100％ 式中：Cl表示解吸液中绿原酸的浓度(mg／mL)； V1表示解吸液的体积(ml )；Co、Ce 、V意义同前。 4.3树脂吸附、脱附的条件 筛选出最佳树脂后，变换条件，得出其对吸附、脱附效果的影响。 4.3.1不同pH值对吸附效果的影响