14 酶促反应动力学-多底物动力学.ppt

第二节 多底物反应及其动力学 一 反应机制的分类： (一) Cleland表示法的基本符号和概念： 底物：依照底物与酶结合的顺序依次用 A、B、C、D表示 产物：根据产物从酶上脱落的顺序用 P、Q、R、S 表示 游离酶：E、F、G 抑制常数：KiA 、KiB ; KiP 、 KiQ 米氏常数：KmA、KmB; KmP 、 KmQ 抑制剂：I 修饰剂：X或Y 反应分子数: Uni(单) 、Bi(双)、 Ter(三) 、Quad(四) 酶反应中间物：分为两类 (1) 稳态中间物： 指酶和底物以共价键结合形成的较为稳定的中间物。可以发生双分子反应而不能自身解离。例如：某些Ser蛋白酶在催化过程中形成的酰化酶中间物 包括：共价结合的ES中间物；自由酶 (2) 过渡态复合物： 非稳定的酶中间物，本身可以单分子解离或异构化之后再解离出产物或底物。 分为: 非中心复合物：酶未完全被底物饱和 中心复合物： 酶已经完全被底物饱和， (EAB EPQ); (EA EP) (2) Theorell- Chance (T-C 机制)： A B P Q E EA EQ E 第二个底物B结合及释放非常快，没有明显的三元复合物变构过程。可看作是三元复合物浓度极低的序列有序机制。 例如：马肝醇脱氢酶： NAD+ 乙醇 乙醛 NADH E ENAD+ E NADH E 2 乒乓机制(Ping-Pang Bi Bi)： 各种底物全部和酶结合以前 ，已经有一种或多种底物放出，不形成三元复合物。 A P B Q E (EA≒FP) F (FB≒EQ) E 属于该机制的酶大多数具有辅酶，如转氨酶、黄素酶等。谷草转氨酶属于典型的乒乓机制： Asp OAA AKG Glu E?CHO (E?CHO?Asp E?NH2 (E?NH2?AKG E?CHO ≒ E?NH2?OAA) ≒ E?CHO?Glu) 总结： 有序机制 序列反应机制 T-C 机制 随机机制 乒乓反应机制 二 King-Altman法——速度方程图示法 (一)Kappa表示法: E + A k1 EA 1 k-1 2 Vf= k1 [A] [E] ; Vr= k-1 [EA] Kappa(К)= 速度常数项 ×底物(产物)浓度项 正向反应的Kappa：К12 =k1 [A] 逆向反应的Kappa：К21 =k-1 反应速度：Vf= К12 [E] ; Vr= К21 [EA] К具有方向性，是一个矢量。其方向与酶形式的 流向有关 (二)King-Altman 法步骤: (1)首先写出反应历程，然后将反应历程安排成封闭环形式。环的角数就是酶存在形式数目，用n表示。然后在各角之间连线上标出各步反应的К。