动物疫病监测采样技术2.ppt

动物疫病监测 定义：调查动物群体中某种疫病或病原的存在情况。 通过监测可以了解动物疫病的流行现状、危害程度、风险因子和发展趋势，早期识别疫病的爆发和流行。 根据信息来源分为：问卷调查和实验室监测。 实验室监测的关键:样品和检测技术。 实验室检测技术 病原检测：病原本身检测，病原特有蛋白检测，病原特有核酸检测，动物试验 抗体检测：琼扩，试管凝集，平板凝集，血凝和血凝抑制，中和试验，各种ELISA等。 在检测技术过关的情况下，监测结果是否具有代表性，是否能够真实反映出疫病的真实情况都与监测样品的采集有重要关系。 一、样品存在的问题 样品的真实性（假样品，一个样品分开） 样品的质量（溶血，腐败，反复冻融） 采样单填写的信息不全（畜禽日龄，免疫情况等） 组织样品采集的太大，不专业。 每一种类的样品用一个采样单。 样品编号不能追溯回去。 二、样品的种类 血液样品：血清，全血抗凝血，血浆 组织样品：心肝脾肺肾脑，淋巴结，扁桃体 粪便样品：新鲜，湿润的 生殖道和精液样品 皮肤样品：皮屑 分泌液和渗出液样品：舌面或蹄部的水泡液 血液样品 血液：最常用的样品，可以做血清学试验的样品，也可以作为病原学试验的样品。 全血（抗凝血）：抗凝剂有肝素，阿氏液，枸橼酸钠和4%EDTA，或者用玻璃珠，脱纤维蛋白。 血清：不加抗凝剂的血液，在室温静置2~4h（或37℃1h），待血液完全凝固后，析出上清即为血清。 血浆：抗凝血混匀后，静置，上清即为血浆。 检测样品的分类 细菌学检测样品：采集发病典型或刚死亡的整体动物送实验室为最好。无菌采集，冷藏，保存液中不加任何抗生素。 病毒学检测样品：病毒检测应在动物病初、体温升高期间采集。以组织脏器、血液、粪便等样品为主 。冷藏或冷冻，保存液中加抗生素。 血清学检测样品：静脉采血3 ml左右，注射器内留一定空间，静置过程或已凝固的血液应低温冷冻，以免溶血。短时间内，可在4度左右保存；如时间较长应冻结保存，注意不能反复冻融. 病理学检测样品：保证样品新鲜，应选择病变最典型最明显的部位，且连同部分健康组织一并采集。 浸泡于酒精或福尔马林溶液中，冷藏保存和运输。 几种重要疫病的采样时机 禽流感、新城疫：发病初期采全血，泄殖腔\咽喉棉拭子；后期采集新鲜粪便；剖剪后的气管，肺脏，肾脏等 口蹄疫：全血，水泡皮，水泡液，O/P液及口腔分泌物和咽喉棉拭子 猪瘟，猪伪狂犬，蓝耳病：全血，血清，组织病料：肺脏，脾脏，淋巴结，扁桃体，流产胎衣等，新鲜精液或冷冻精液 猪流感：在发热期采集鼻咽棉拭子和肺组织病料。 三、高品质样品的特征 四、如何得到高质量的样品 1、采样前的准备-器具 采样工具：一次性注射器，解剖刀，剪刀，镊子，酒精灯，酒精棉，棉签，保定动物专用工具 样品存放用具：塑料离心管（1.5，2，5ml），自封口样品袋，试管架，塑料样品盒，胶布，封口膜，冰袋。 防护用具：一次性手套，鞋套，口罩，隔离衣等。 记录用具：不干胶标签、圆珠笔、油性记号笔、采样单、记录本等 2、采样前准备—采样技术 血液样品：牛、马、羊从颈静脉或尾静脉采血；猪从前腔静脉采血，用量少时也可从耳静脉抽取；家禽从翅静脉抽取。 棉拭子样品：泄殖腔，咽喉，鼻腔 水泡皮及水泡液： O/P液：保定，左手拉出舌头或从嘴的一侧按住舌头，右手缓慢放入探杯。 组织样品：解剖，洁净取样。 血液样品的分离方法 抗凝血：采血前在试管或注射器内按比例加抗凝剂，运输时必须减少震荡以免溶血。 非抗凝血：分离血清 血清析出好的因素：容器：玻璃试管优于塑料离心管；斜面：与空气接触面要大。温度：最佳温度是体温；时间：室温静置最短2小时；离心：转速要低，2000转。 胶冻状血清的成因：采血前刚刚喂食（没有空腹）；凝血时间不够；脂肪血（营养过剩） 粪便、棉拭子和O/P液样品的采集 泄殖腔拭子的采集：将棉拭子插入泄殖腔约1.5~2cm,旋转后沾上粪便。 咽喉拭子、鼻腔拭子的采集：将灭菌的干棉拭子插入口腔至咽的后部或鼻腔，轻轻擦拭并慢慢旋转将拭子拔出，将棉拭子放入缓冲液内。 O/P液是从动物食道/咽喉刮取的黏膜样品，用特制的食道探环刮取黏膜，放入样品保存液中。 水泡液及水泡皮的采集 用75%酒精消毒水泡表皮，用灭菌生理盐水擦去酒精，用注射器穿刺吸取水泡液，置于含抗生素的PBS缓冲液中；然后用剪刀将水泡皮剪下，放入含抗生素的PBS缓冲液中。 3、采样的准确性和时效性 代表性：应该考虑到整个监测区域的地理分布，选取有代表性的点。如动物品种分布、日龄、饲养密度、地势特点、交通特点、动物迁徙习性等因素。如禽流感采样时，疫区交接处，野鸟迁徙途径，水禽家禽混合饲养处等。 时效性：如抗体监测，免疫后14天左右才可以采集；监测病原时，注意排毒时间和病原的易嗜细胞和组织，在监测时要根据不同时期，采集不同部位