3-光学分析法与元素分析法.ppt

第三章 光学分析法 光分析方法的分类 紫外-可见光度计仪器组成 一、基本组成 general process 二、分光光度计的类型 types of spectrometer 一、基本组成 general process 2.单色器 3.样品室 二、分光光度计的类型 types of spectrometer 光路图 具体应用 一、定性分析 二、纯度检查 三、定量分析 四、固体样品的分析 一、定性分析 1、利用标准物质定性 在相同条件下，用光谱扫描法测定未知物的吸收光谱，与所推断化合物的标准物的吸收光谱进行比较，如果两吸收光谱的形状和吸收峰的数目、位置、拐点等完全一致，就可初步判定未知物与标准物是同一种物质。但要注意，物质不同但光谱相似的特殊情况。2、用波长位置判断有机化合物的生色基团 例如，若发现在210-250nm有强吸收峰，则可能有双键并处在共扼状态。在260nm、300nm、330nm有高强度的吸收带，表示有3-5个共扼单位，如在270-300nm之间有弱吸收(e=10-100)，表示有羟基的存在；在250-300nm之间有中强度吸收(e=1000 -10000)，表示有苯环存在等。 二、纯度检查 主要用于检查对光没有特征吸收的化合物中的具有特征吸收的杂质。  如检查乙醇中醛的量，可用蒸馏水作参比，在270 -290 nm处测量吸光度，如在280nm处有吸收，表示有醛。 双波长或三波长核酸（DNA、RNA）的测定时，根据A260 / A280的比值可确定DNA或RNA的纯度。对于DNA，比值为1.6-1.8之间,RNA比值为1.8-2.0之间,认为纯度较高。 又如四氯化碳中，最主要的杂质是二硫化碳（CS2）。二硫化碳杂质的多少，衡量产品质量的好坏。二硫化碳在紫外区的318nm处有一个很强的吸收峰。因此，只要检查318nm处二硫化碳吸收峰的大小，就可知道四氯化碳产品是否合格。 三. 定量分析 定量分析方法 1、绝对法 基于朗伯-比尔定律A =ebC ，当某一物质在一定波长下e为一常数，比色皿的光程也是已知，也是一个常数，只要在吸收系数指定的波长处测定样品溶液的吸光度值(A值)，然后由下式求得该样品溶液的浓度或含量： C = A / e b 2、标准对照法  在同样条件下，在选定的波长处，分别测定已知浓度标准溶液的吸光度值A标和样品溶液的吸光度值A样，然后由下式求得样品溶液的浓度或含量： C样 = A样 ? A标 ? C标 四、固体样品的分析 固体样品分析的配件主要有：积分球、镜面反射装置、固体样品支架、凝胶扫描装置及凝胶薄膜支架等。 积分球是利用固体样品的正反射（入射光按以法线为中心的对称角度反射，称镜面反射）或漫反射（入射光向各方向反射）的特性进行分析的装置。 镜面反射装置主要用于半导体、光学材料的反射率测试。 固体样品支架、凝胶扫描装置及凝胶薄膜支架用于光学玻璃、电泳胶条等的测定。 积分球、镜面反射装置是利用光的反射原理进行定性、定量测定。如配备有透射样品池架，也可进行样品溶液的透射测定。如配备大内径积分球（Φ150mm）可测定粉状、纸、布料及溶液等样品的反射透射光谱，同时最适合于色彩分析。 镜面反射装置主要用于半导体、光学材料的反射率测试。还可以利用光的干涉原理测定膜的厚度。 1.分子荧光分析的理论基础 分子荧光也称紫外-可见光荧光，即利用某些物质受到紫外-可见光照射后，发射出比吸收的紫外-可见光波长更长或相等的紫外-可见荧光。通过测定物质分子产生的荧光强度进行分析的方法称为分子荧光分析。 4.应用 荧光分析方法在有机化合物及其它领域中的应用也很广泛。在一般的有机物和生物化学物质方面包括100多类物质分析，例如，腺嘌呤、氨茴酸、芳香多环碳氢化合物、半光氨酸、胍、吲哚、萘酚、蛋白质、水杨酸及尿酸等；在医药试剂分析方面，有50多类可用荧光方法进行分析，例如，肾上腺素、烷基吗啡、氯奎、青霉素、普鲁卡因、利血平及本巴比妥等；还包括甾类化合物和酶、辅酶等；在植物制品方面包括叶绿素、萝芙藤螺旋生物碱、黄烷酮类及鱼藤酮类等；还包括维他命及维他命制品等，以及食品和天然产品的分析。 荧光分析方法较高的灵敏度和选择性使得它在这些领域成为一种特别有用的分析工具。 一、维生素A的测定 维生素A存在于动物性脂肪中，主要来源于肝脏、鱼肝油、蛋类、乳类等动物性食品中