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2.1 试验材料 （1）样品来源：河北威远生化制药厂阿维菌素好氧处理反应器中的活性污泥； （2）化学药品：酵母膏、抗生素、FeSO4.7H2O、(NH4)2SO4 、CaSO4 、K2HPO4 、MgSO4 、乳糖 、蔗糖 、葡萄糖 ； （3）培养基：无机培养基； （4）实验仪器：电子天平（BP110 S型 ）、生化培养箱（250B ）、恒温摇床（HQ45Z ）、震荡培养箱（3S-1E ）、数字酸度计（PHS-2C ）、可见分光光度计（VIS-72200）等。 （2）菌株DAF的形态观察及生理生化特性 由于时间紧，任务重，没有对菌株DAF进行16S rDNA序列分析测定，并且，可能还有些不了解的问题，这些问题，希望在以后的日子里，通过与老师和同学们的讨论中得到解决！！！ 降解阿维菌素菌体的分离与初步鉴定 学 生：付常松 学 号：050401114 指导教师：国 洁 2009年6月8日 目录 1 引言 2 试验材料与方法 3 结果分析 4 结论 5 致谢 本论文的研究内容主要包括以下几个方面： (1) 阿维菌素降解菌的分离与纯化； (2) 电镜检测； (3) 抗生素敏感性试验； (4) 最适生长条件的确定（阿维菌素浓度、酵母膏浓度、pH值、不同营养源）。 1、引言 2、试验材料与方法 2.1 试验材料 2.2 试验方法 2.2 试验方法 （1）阿维菌素降解菌的驯化与分离：用稀释平板法分离细菌，经反复平板涂布，当提高阿维菌素浓度到250mg/L时选育出一株菌株。 （2）菌体培养方法：好氧异养培养，培养基采用富集培养基，调节pH值为7.2左右。采用摇瓶培养，摇床转速为120r/min，温度为30℃。 （3）菌株的电镜检测:用扫描电镜观察菌株的形态，放大倍数为10000倍。 （4）菌体生物量的测量:菌体生物量通过VIS-72200-可见分光光度计进行测定。其中，菌体生物量用660nm下测定的吸光度(OD660)表示。 （5）菌株最佳培养条件的选择:菌株DAF在好氧培养条件下，主要考察了不同的营养基质、pH值、阿维菌素浓度对菌体生长的影响。 （6）菌株的抗性实验:选择了五种常用的抗生素：土霉素、青霉素、链霉素、庆大霉素、盐酸霉素进行实验。 3、结果分析 3.1 阿维菌素降解菌的分离纯化与鉴定 3.2 阿维菌素降解菌DAF的生长特性研究 3.1 阿维菌素降解菌的分离纯化与鉴定 （1）阿维菌素降解菌的驯化分离 菌株DAF在固体培养基上呈圆形，菌落较小，边缘整齐，表面光滑，菌体呈淡黄色，极易挑起。 菌株DAF的细胞为杆状，无鞭毛，大小为1 μm × 0.5μm。菌株DAF为革兰氏阴性。 3.2 阿维菌素降解菌DAF的生长特性研究 （1）菌株DAF的抗性实验结果:菌株DAF对青霉素敏感，无抗性，而对土霉素、链霉素、庆大霉素、盐酸霉素，具有抗性。 （2）营养源的利用: 因此，微生物在酵母膏培养基中生长速率较快。 （3）最佳生长pH值的确定: 因此，pH值为7时，菌体生长最好。 （4）菌株DAF在不同阿维菌素浓度条件下的生长情况: 因此，阿维菌素度浓度为400mg/L时生长最好。 （5）单一碳源: 因此，菌株能够以阿维菌素为唯一碳源生长，从而间接判断菌株DAF对阿维菌素有降解作用。 （6）不同酵母膏浓度对菌株生长的影响: 因此，菌株DAF的最适酵母膏生长浓度为10g/L。 4、结论 菌株DAF在固体培养基上菌落较小、圆形、边缘整齐，表面光滑，菌体呈淡黄色，极易挑起，细胞为杆状，无鞭毛，大小为1μm × 0.5μm； (2) 经染色试验知此菌株为革兰氏阴性菌； 菌株DAF可以在好氧异养条件下生长，该菌株对青霉素敏感，不具有抗性，而对土霉素、链霉素、庆大霉素、盐酸霉素不敏感，具有抗性； (4) 菌株DAF在30℃的条件下的最佳生长条件：酵母膏浓度为10 g /L，pH值为7，阿维菌素浓度为400mg/L。 请老师提出宝贵意见 谢谢！