新生仔猪小肠上皮细胞体外培养地研究.pdfVIP

第23卷 第 1期 仲恺农业工程学院学报 Vo1．23，No．1 2010年3月 JournalofZhongkaiUniversityofAgricultureandEnsineefing March，2010 新生仔猪小肠上皮细胞体外培养的研究 李 莉，高淑静，张守全，陈俊伟，陆咸赏，罗 园，江青艳 (华南农业大学动物科学学院，广东广州 510642) 摘要：采用灌肠消化、组织块消化、机械刮取+胰蛋白酶消化和机械刮取+胶原酶消化等4种方法对仔猪小肠 黏膜上皮细胞 (Intestinalepithelialcell，IEC)的体外分离培养进行了比较．结果表明，使用机械刮取+胶原酶消 化法分离IEC，可简便快速地获得数量大、活性高的小肠上皮细胞，其中原代培养细胞24h出现贴壁，7～8d 明显增殖，1O一12d贴壁细胞汇合成片，18—21d细胞呈 “铺路石”状；传代培养细胞3h出现贴壁，3～4d 快速增殖．采用碱性磷酸酶显色反应检测，90％以上的贴壁细胞呈阳性反应． 关键词：猪；小肠；上皮细胞；原代培养；传代培养 中图分类号：Q2-33；$811．4 文献标识码：A 文章编号：1674—5663(2010)01—0030—04 Studiesonisolationandprimarycultureofneonatepigletintestinalepithelialcell LIli，GAOShu-jing，ZHANGShou—quan，CHENJun—wei，LUXian—shang，LUOYuan，JIANGQing—yah (CollegeofAnimalSciences，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China) Abstract：Inordertoobtainpure，viable，andfunctionalintestinalepithelialceils(IEC)frompiglets， fourdissociationmethodsincludingcoloclysisdigestion，organizationblockdigestion，mechanicalscrape plustrypsin digestionand nad mechanical scrapepluscollagenase digestion were tested．Theresults showedhtatmechanical scrapepluscoliagenasedigestionwasthebestmehtodtoisolateIEC．About24 hoursafterinoculation，IECatatchedtohtesurfaceofhteconatiner．Thecellsproliferatedobviouslyat7 — 8daysofculture．reached80％ ofconfluenceat10～12daysandshowed “pavement”typical charac— terat18—21days．About3hoursaftersplitfrom theprimarilyculturedcells，IECbegantoattached， andremarkablyproliferatedat3～4days．Histochemicalstainingforalkalinephosphatase(AKP)re— vealedthatAKPactivitywaspositiveinmorehtan90％ ofhteattachedcelis． Keywords：pig；smallintestine；epihtelialcell；primary culture；passageculture 小肠是食物进行消化吸收的主要场所，而小肠 培养方法，希望能够为相关研究与应用提供参考． 黏膜上皮细胞是肠道主要的功能细胞，参与肠道食