壳聚糖固定化茶皂素脱色酶及其酶学性质的研究.pdfVIP

澎江学矸学 2014年第3期 墨囫 文献著录格式：李艳丽，陈列忠，陶瑛妮．壳聚糖 固定化茶皂素脱色酶及其酶学性质的研究 [J]．浙江农业科学，2014 (3)：387—389 壳聚糖固定化茶皂素脱色酶及其酶学性质的研究 ’ 李艳丽 一，陈列忠 ，陶瑛妮。 (1．浙江省农业科学院 植物保护与微生物研究所，浙江 杭州 310021；2．浙江省植物有害生物防控重点实验室 一省部 共建国家重点实验室培育基地 ，浙江 杭州 310021；3．浙江 中医药大学 ，浙江 杭州 310053) 摘 要：以壳聚糖微球为载体，戊二醛为交联剂，对茶皂素脱色酶进行固定化，并对固定化酶的各种性质 进行了研究。结果表明，0．5g壳聚糖微球在5mL2．0％的戊二醛溶液中交联，固定5mg茶皂素脱色酶，最终获 得的酶活回收率为65．94％。固定化酶的最适温度为50oC，最适 pH值为3．5，固定化酶的热稳定性、pH值稳定 性 以及保存稳定性都明显优于游离酶，该固定化酶还具有 良好 的操作性 。 、 关键词 ：壳聚糖 ；固定化 ；茶皂素脱色酶 中凰分类号 ：S182 文献标志码 ：A 文章编号 ：0528-9017(2014)03-0387-03 茶皂素作为一种从 山茶科植物种子 中提取 的 1．2 茶皂素脱色酶的固定 化合物 ，具有优 良的乳化 、分散 、湿润 、起泡 、 壳聚糖微球的制备参考文献 [6]。 稳泡等作用 ，用途广泛 ，但产品色泽深、含量低 茶皂素脱色酶 的固定。称取适量壳聚糖微球 ， 却是限制其开发利用的主要质量原因。本研究室 加入一定浓度 的戊二醛 ，在室温下搅拌 ，静置过 已从黄孢原毛平革菌发酵液中分离到 了一种可以 夜 ，离心去上清液，将载体用蒸馏水冲洗以除去残 脱色茶皂素的生物酶 ，但 由于 自由酶本身具有不 余的戊二醛 ，抽滤。往交联好的壳聚糖微球 中加入 可重复使用 、容易变性失活等…特性 ，限制 了其 茶皂素脱色酶液 ，在室温下缓慢搅拌 ，静置过夜 。 实际应用 。酶固定化技术是实现酶重复连续使用 离心弃去上清液，沉淀用蒸馏水反复冲洗 ，抽滤即 的有效手段 。 得 固定化酶 。 壳聚糖分子中含有游离氨基 ，双功能试剂如戊 1．3 酶活测定 二醛等与壳聚糖及蛋 白酶上 的氨基均能发生 Schiff ‘ 脱色酶的活力定义为每毫升酶液 (或每克酶 反应 ，因此可用其来作为固定化酶的载体。壳聚糖 粉)1h内将茶皂素底物缓冲液在475nm条件下 D 作为固定化酶载体还具有机械性能好 ，化学性质稳 值降低 1％为一个酶活单位 U。 定 ，耐热性好以及使酶免受金属离子抑制等优点， 底物缓冲液 的配置。以茶皂素做为底物 ，用 成为近年来 国 内外研 究最热 门的固定化材料之 pH值 5．0的0．1otol·L 醋酸缓冲液溶解 ，配制 一 。 本试验采用壳聚糖 固定茶皂素脱色酶 ，探 成的溶液在 475nm分光光度计下测定D值为3．5。 讨了固定化酶脱色茶皂素的影响因素。 自由茶皂素脱色酶活性测定 。取0．5mE酶液， 加入3．5mL的底物缓冲液 ，混合均匀后置于4O℃ 1 材料与方法 水浴中保温 1h，475am分光光度计下测定 D，并 1．1 试验材料 ， 计算其降低百分 比。固定化茶皂素脱色酶活性测定 茶皂素脱色酶 由本实验室分离纯化，活力单位