从母血浆提取胎儿DNA行产前诊断的研究.pdf

( ) 第 24 卷 　第 2 期 武汉大学学报 医学版 Vol . 24 ,No . 2 　2003 年 4 月 Medical Journal of Wuhan University Apr ,2003 从母血浆提取胎儿 DNA 行产前诊断的研究 王 　萍 　张元珍 　王 　燕 　胡伦颖 　马建鸿 武汉大学中南医院妇产科 　武汉 　430071 摘要 　目的:从孕妇血浆中提取胎儿 DNA ,寻找一种非创伤性产前诊断的新方法 。方法 :采用煮沸法从血浆中 提取 DNA ,结合巢式聚合酶链反应技术对 40 例 10～40 孕周的孕妇血浆中的胎儿 DNA 进行特异性扩增 ,扩增的基 ( ) 因为 Y 染色体的重复序列 DYZ1 基因 ,扩增片段大小为 102 bp 。结果 :30 例孕育男性胎儿孕妇中有 26 例血浆中出 现 DYZ1 基因扩增带 。10 例孕育女性胎儿孕妇血浆中 ,仅 1 例出现假阳性结果 。结论 :采用巢式聚合酶链技术在不 同的孕期检测母体血浆中的胎儿DNA 均有较高的灵敏度和特异性 ,作为一种非创伤性产前诊断的方法应用于临床 具有可行性 。 关键词 　产前诊断 ;聚合酶链反应 ;胎儿 DNA 中图分类号 　R 714 . 1 　　目前临床上应用的产前诊断的方法多需要进入 1. 2. 2 　DNA 的制备 　取外周血 2 ml ,经 EDTA 抗凝 宫腔才能取得胎儿的遗传物质 ,大大增加了胎儿流 之后 , 以3 000 ɡ离心 10 min ,小心转移上清 ,重复离 产的危险 。因此 ,在大多数情况下只有高危孕妇才 心 1 次 。将血浆置 - 20 ℃备用 。每例血浆装于 1 会进行产前诊断 。要使产前诊断真正能造福于广大 个 0 . 5 ml 的离心管中 ,加热 99 ℃,5 min 。12 000 ɡ 妇女 ,就必需寻找一种非创伤性获取胎儿遗传物质 室温离心 ,10 min 。取上清作为巢式聚合酶链反应模 的新方法 。 板 。 从孕妇外周血中分离胎儿细胞一直是遗传病非 1. 2. 3 　PCR 创伤性产前诊断的主要思路与探索途径 。然而胎儿 [3 ] 1. 2. 3 . 1 　引物的合成 　引物按文献设计 合成 ,序 细胞的富集效率低和过高的母体背景影响胎儿特异 列如下 :Y1. 1 5 ’TCCACTTTATTCCA GGCCTGTCC 3 ’ 等位基因的检测 ,使其难以成为临床实用的非创伤 Y1. 2 5 ’TTGAATGGAATGGGAACGAATGG 3 ’ 性产前诊断的检测方法 。近年来 Lo 发现[ 1] ,在孕妇