BNPAGE在分析蛋白质中的应用.pdfVIP

畜牧与饲料科学 Animal andFeedScience 2009，30(3)：28—30 Husbandry BN—PAGE在分析蛋白质中的应用 蔡家海，刘春林 (湖南农业大学农学院，植物资源与利用国家重点培养实验室，湖南长沙410128) 摘要：采用温和凝胶电泳系统可以有效地分离蛋白质复合物，结合SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳系统可以将多亚基蛋白质分离。 利用免疫印记对蛋白质复合物进行初步鉴定。同时还可以利用蓝绿温和凝胶电泳系统分析复合物的组成。 关键词：蓝绿温和凝胶电泳；蛋白质复合物；聚丙烯酰胺凝胶；免疫印记 中图分类号：Q503 文献标识码：A 以等电聚焦(isoeleetrie 物遮蔽．这就要求人们在BN—PAGE技术中应对感兴趣的 focusing，IEF)为第一向的双向 聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D—PAGE)是目前分离蛋向质最常复合物进行预处理。例如：透析、超滤：去除高丰度的蛋白 用的技术…。但是～些分子质量较大的蛋白质(200ku)， 复合物可以用亲和层析和分馏：分段分离除利用复合物 偏酸偏碱的蛋白质以及疏水性较强‘的膜蛋白质的分离． 的大小外还可以利用它的特性，如亚细胞器分离、离子交 采用2D—PAGE往往不能得到理想的结果。1991年，换层析(7-S】。 Schagger等为了研究哺乳动物和真菌线粒体中的多亚基 蛋白质复合物．建立了一种蓝绿温和凝胶电泳系统 污剂相对来说仍很少．在研究膜蛋白复合物中。寻找合适的 (blue-native 去污剂对于增溶不同的蛋白复合物是个关键。在BN—PAGE polyacrylamidegeleleetrophoresis，BN)。 BN—PAGE称之为蓝绿温和凝胶电泳C2：。是以考马斯亮蓝中适合增溶蛋白复合物的去污剂必须满足几个必要条件。 G一250D代替SDS使蛋白质复合物带负电荷，用温和的去它必须足够温和，但是能够破脂质一脂质之间的相互作用。 不干扰复合体中蛋白质的组成。破裂一个复合体的时候，去 污剂，如dodecylmaltoside(DM)、TritonX一100和毛地黄皂 污剂也不应该干扰电泳。破裂某一个类脂一蛋白质联合通 苷(digitonin)等增溶膜蛋白复合物，从而使复合物以近似 天然的形态分离。这种方法随后被用于各种生物膜。包括 常不是我们希望的，因为这有可能导致弱化或者分解蛋白 质膜、类囊体膜、叶绿体外膜等系统的研究[2-3]。在蛋白复 合体得到分离后．将第一向的泳道切下进行第二向的 SDS—PAGE，各个复合物的亚基就能得到分离C4]。目前结 合更加精益求精的增溶方法，BN—PAGE已经被用来检测能也适合增溶膜蛋白复合体。通过不同的去污剂与不同盐 较大蛋白质复合体的相互作用，导致了超级复合体的出现…31， 类中蛋白质比率的测试．来确定最佳的去污剂和正确的增 按该观点可以用BN—PAGE调查研究植物蛋白质复合体溶条件mj。 的结构以及各个亚基之间的相互作用。 1 BN胶 性蛋白复合物的报道到目前为止还比较少。直接利用可溶 1．1 BN—PAGE电泳分离的原理传统的变性SDS—PAGE性植物细胞的提取物进行BN—PAGE可能导致图形模糊或 技术中，离子型变性剂SDS的功能包括增溶和使蛋白质 者电泳条带较窄或者较宽，这常常是由于跑胶过程中不适 变性．同时提供负电荷，因此蛋白质的流动是单向的。在 当的盐浓度引起的，我们可以通过改变缓冲液来适合BN BN—PAGE中这种多重的功能可以通过不同的去污剂来的标准条件，如样品的透析。然而，必须小心谨慎地处理溶 实现15-6]。有时候变性不是我们所希望的，但是对于膜蛋解的蛋白质复合体．蛋白质复合体在高浓度盐环境下比膜 白复合物的增溶是必需的．这可以通过温和的非离子型 蛋白复合体更容易断裂．有时候低浓度的盐