ATCC菌种保藏与使用.ppt

ATCC标准菌种复苏与使用指南 “KWIK-STIK Microorganisms”产品的使用说明 防范与限制 Precaution and Limitation 这类产品仅适用于体外实验。 这些设备以及后来在培养基上生长出的微生物属生物危害材料 这些设备含具有活性的微生物，在一定的环境下可能致病。需使用适当的技术避免任何微生物的暴露和接触。 微生物实验室需有相关实验装备，且有可接收、处理、储存、丢弃生物危害材料的设备。 使用这类设备的微生物实验室工作人员必须在生物危害材料的操作过程，维护，储存，丢弃等方面接受过培训，具备一定经验，能熟练示范。 相关机构和法规对生物危害材料的处理作了规定。各实验室需了解并遵守该生物危害 材料处理规定。 储存与有效期 Storage and expiration 在原装密封瓶或含干燥剂的袋中的KWIK-STIKTM应存放在2℃~8℃。 冻干的微生物制剂在有效期内将保持其规格和性能，有效期在设备标签上标明。 若出现以下情况则不能使用： 储存不正确; 有过度暴露在湿热环境中的迹象; 己过有效期。 Microorganisms公司产品 Kwik-Stik 操作流程 注:请严格按照操作流程”、“推荐生长条件”和“推推荐培养方法”活化标准菌株，不建议使用实验室自己的方法及文献方法活化标准菌株，否则菌种供应商不保证菌株的质量且不提供相应的售后服务。 LYFO DISK 操作流程 Kwik-Stik Lyfo Disk 推荐生长条件 如何选择最适合的菌种生长条件 1.最初的生长最好是在非选择性琼脂培养基上。除非特殊情况或特别推荐，最初的生长一般不考虑液体培养基。这是由于在液体培养基中获得冻干菌株的纯种比较困难，污染所带来的杂菌可能会过度生长，影响得到目标菌株的纯种。 2、以下列出可供选择的琼脂培养基和相应的生长条件，供各实验室培养菌种时参考。 方法1 胰蛋白胨大豆琼脂，非选择性羊血琼脂，标准计数平板，或营养琼脂——35℃,正常环境，24-48小时。 方法2 非选择性羊血琼脂——35℃，正常环境，24~48小时。在培养链球菌属和隐秘杆菌属时，CO2环境可提高其生长。推荐使用5%CO2环境来培养肺炎链球菌和其他甲型溶血性链球菌。 方法3 巧克力琼脂——35℃，5%~10%的CO2环境，24-48小时。 方法4 厌氧血琼脂——35℃，厌氧环境，48-72小时； 部分专性厌氧菌可能需要5~7天，才能充分生长； 对于梭菌，以下新鲜配制的平板也可选用：营养琼脂，胰蛋白胨大豆琼脂和标准平板计数琼脂(标准方法琼脂)；只是需额外培养24小时。 方法5 沙保氏葡萄糖 Emmons琼脂——25℃，正常 环 境 ，2~7天； 非选择性羊血琼脂也可选用 ； 以下培养基也可选用：营养琼脂，胰蛋白胨大豆琼脂， 马铃薯 葡萄糖琼脂和标准平板计数琼脂 ，只是需额外培养24小时。 方法6 巧克力琼脂——35℃，微需氧环境，48-72小时。 方法7 Lowenstein Jensen琼脂或Middlebrook琼脂——35℃，5%~10%CO2环境或正常环境，7天。M. fortuitum subsp. fortuitum, M. peregrium 和M. smcgmatis也可以选用胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)和Lowenstein Jensen琼脂或Middlebrook琼脂一样，只是需额外培养一些时间。 方法8 缓冲活性炭酵母提取物琼脂——35℃，正常环境，3-5天。 方法9 V琼脂或巧克力琼脂——35℃，5%~10%，CO2环境，48小时。 方法10 菌种水解可选用无菌脑心浸出液肉汤，胰蛋白胨大豆肉汤，或0.85%生理盐水。无菌水水解可能会导致活力下降或不复苏。在KWIK-STIK包装中自带的培养基使得菌种很好的复苏。 在胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)上生长——35℃，正常环境，24-48小时。Vibro SP.也可在Marine琼脂上生长 方法11 先接种于MRS肉汤中——35℃，正常环境，48小时; 然后接入含羊血的哥伦比亚CNA培养基中——35℃，5-10%CO2环境，48小时。 方法12 马铃薯葡萄糖琼脂——55℃,正常环境，48小时。 各类菌种推荐培养方法 加拿大PROLAB microbank 菌种保藏管 简介与说明： 微生物的长期保存是一个挑战，生物需要低温贮存并尽量提供最少干扰的可能性。然而，Microbank?提供了一种保存液来应对对这个问题。 用途： 标记颜色的25 个小珠被包装容纳在包含保存剂的保存管里，小珠被冲洗和吸附细菌在上面，之后保存管在贮存期内保持在-70°C，当需要培养，单个小珠很简单的移出保存管，并直接划线在微生物培养基上。 操作步骤 A．准备 1．使用一个准